[發明專利]一種福氏紫薇組培再生體系建立的方法

在審

• 申請號: 201711100467.3
• 申請日: 2017-11-09
• 公開（公告）號: CN109757370A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 陳紅;吳寒;陸小清;李乃偉;周艷威;張凡;李云龍;王傳永
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所;南京農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種福氏紫薇組培再生體系建立的方法，該方法利用福氏紫薇種子萌發獲得無菌實生苗，然后剪取幼嫩葉片為外植體，通過對外植體進行脫分化培養，獲得再分化能力強的愈傷組織，進而利用愈傷組織進行再分化培養和后續的生根培養實現再生植株。本發明利用無菌實生苗為外植體，避免了傳統的外植體由于分化程度高而脫分化不易和污染率高的問題，操作簡單、可行。具體包括以下幾個步驟：1.實生無菌苗的獲得；2.愈傷組織的誘導；3.愈傷組織的繼代和增殖；4.愈傷組織的再分化；5.生根培養；6.植株再生。本發明中褔氏紫薇的愈傷增殖倍數達2.1倍，組培再生率達到95%以上，為紫薇遺傳轉化體系的建立奠定了堅實的實驗基礎。

技術領域

本發明涉及一種福氏紫薇組培再生體系建立的方法，屬于木本植物組織培養技術領域。

背景技術

紫薇（Lagerstroemia indica）屬于千屈菜科（Lythraceae）紫薇屬，別名“百日紅”、“滿堂紅”。紫薇原產中國，是我國傳統名花之一。國內應用的主要有大花紫薇（L.speciosa）、福建紫薇（L.limii）、南紫薇（L.subcostata）等，國外廣泛栽培的也只有大花紫薇和紫薇兩個種。紫薇通常用作落葉灌木或喬木栽植，由于紫薇樹干光滑，樹姿優美，適應性強，常作為行道樹、街景樹栽培，有些城市以紫薇作為市花（樹）。

在育種方面，美國育種學家從1962年開始進行紫薇的育種研究，通過種內、種間雜交育種，選育出抗白粉病且花色紅艷的品種，日本Takii 種苗株式會社利用從我國引進的紫薇資源，選育出矮生多花品種。近年來，我國也開始充分利用國內豐富的紫薇資源進行雜交育種及相關的研究，有望選育出一批有觀賞價值的新品種，從而更好的豐富紫薇園林應用品種。

由于傳統的遺傳育種具有較大的盲目性，選育周期長等缺點，而現代的細胞工程育種和分子育種等手段克服了這些缺點。近年來，木本植物組織培養研究獲得了很大進展，如楊樹、梅花、桉樹、懸鈴木等，其再生可通過體細胞胚發生途徑或器官發生途徑來完成，但對于木本植物，從營養器官誘導體細胞胚非常困難。通過組織培養的方法使植株再生是對植物進行轉基因改良的重要前提條件，目前絕大多數的遺傳轉化體系都需要建立一個穩定的植株再生體系來進行基因的轉移、轉化植株的選擇和再生，包括直接或間接的再生體系已被廣泛用于植株遺傳改良。

發明內容

為給紫薇遺傳轉化奠定基礎，本發明提供一種福氏紫薇（大紅花紫薇：LagerstroemiaבTuscarora’）組培再生體系建立的方法。

為達到上述目的，本發明提供了一種福氏紫薇組培再生體系的方法，具體步驟如下所述：

本發明提供了一種福氏紫薇組培再生體系的方法，具體步驟如下所述：

1）實生無菌苗的獲得

采收褔氏紫薇健康母樹上發育良好的種子，人工去掉種翅并防止損傷種皮，進行消毒：先用自來水沖洗30min，然后75％乙醇處理30s； 1% 次氯酸鈉滅菌 15min，然后無菌水沖洗 5 次，消毒后播種于 MS 基本培養基中，獲得生長健壯的實生苗；

2）愈傷組織的誘導

剪取步驟（1）中無菌培養20天的葉片，垂直葉片主脈剪 3～4 下，保持一側葉緣相連，葉片正面朝上接種于愈傷誘導培養基1/2MS+6-BA 1.0mg/L +2, 4-D 1.0 +蔗糖30g/L+瓊脂7g/L中，暗培養處理7天，培養溫度25℃左右，光照強度2000-3000lx，光照時間14h/d；

3）愈傷組織的繼代和增殖