[發明專利]一種羅漢果組培快繁工藝技術

在審

• 申請號: 201711099792.2
• 申請日: 2017-11-09
• 公開（公告）號: CN107593456A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 羅榮棋
• 申請（專利權）人: 羅榮棋
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所45109
• 代理人: 吳安儀

技術領域

本發明屬于藥果類，具體地說，涉及一種羅漢果組培快繁工藝技術。

背景技術

羅漢果又名：拉漢果。多年生攀援草質藤本，長2~5米。嫩莖暗紫色，有白色和黑褐色短柔毛，嫩枝葉折斷有淺紅色汁液溢出。根塊狀。卷須側生于葉柄基部，葉互生，單葉，葉片卵形，先端尖，基部心形，邊緣全緣或有不整齊的小鈍齒，葉面有短柔毛，葉脈上的毛較密，嫩葉通常暗棕紅色，密布紅色腺毛，沿葉脈密生短柔毛；6月開花，雌雄異株；花淡黃而微帶紅色，排成總狀花序生于葉腋；8~9月結果，果實卵形、橢圓形或球形，長4.5~8.5厘米，果皮薄，密生淡黃色柔毛，嫩時深棕紅色，成熟時青色，內含多數種子。種子扁平圓形，淡黃色，邊緣有槽。果實成熟后，用慢火烘干。生長于廣西，喜生于涼爽多霧的山坡向陽處。味甘，性涼。具有清熱潤肺，滑腸通便的作用。目前，羅漢果主要是以種子繁殖,但其藥用部分也是種子,這在一定程度上降低了其藥材的產量。因此，本發明以羅漢果種子為外植體，通過愈傷組織誘導、增殖、分化、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了羅漢果離體再植株，建立羅漢果組織培養快速繁殖技術體系。

發明內容

本發明的目的在于提供一種羅漢果組培快繁方法，本發明以羅漢果種子為外植體，通過愈傷組織誘導、增殖、分化、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了羅漢果離體再植株，建立羅漢果組織培養快速繁殖技術體系，從而實現了本發明的目的。

本發明的一種羅漢果組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）無菌苗的獲得：選取飽滿的羅漢果種子,在超凈工作臺中用手術剪刀剝去種皮，用75%酒精消毒20s，再用0.1%升汞溶液消毒5min，最后用無菌水漂洗1次，用無菌濾紙吸干表面水分后接種到種子萌發培養基中，接種后每天光照28小時，光照強度為2300lx，培養溫度為21℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養15天后統計萌發率，所述的萌發培養基為：1/2MS+0.09mg/LNAA+12g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂，pH為5.2：

（2）愈傷誘導：當無菌苗的子葉剛展開時,取無菌苗的莖尖作為外植體,用解剖刀切成0.2cm左右長度,接種于用于愈傷誘導的培養基中培養，接種后每天光照10小時，光照強度為2300lx，培養溫度為21℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養35天后統計誘導率，所述的愈傷誘導培養基為：MS+3.5mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+1.2mg/L KT+35g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.2：

（3）增殖培養：將步驟（2）誘導得到的愈傷組織切割成0.2cm³大小的小塊并轉入增殖培養基進行擴繁，接種后每天光照10小時，光照強度為3300lx，培養溫度為23℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養35天后統計增殖情況，所述的增殖培養基為：MS+2.5mg/L6-BA+1.0mg/L NAA+35g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.3：

（4）分化培養：將步驟（3）增殖得到的愈傷組織切割成0.2cm³大小的小塊并轉入分化培養基誘導不定芽的產生，接種后每天光照18小時，光照強度為3300lx，培養溫度為23℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養35天后統計分化情況，所述的分化培養基為：MS+1.5mg/LKT+2.5mg/LNAA+35g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.2：

（5）生根培養：將步驟（4）分化得到不定芽從基部切下并接種至生根培養基中進行誘導生根，接種后每天光照15小時，光照強度為3200lx，培養溫度為29℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養32天后統計生根情況，所述的生根培養基為：1/2MS+1.2mg/LIBA+1.2mg/L NAA+1.2%活性炭+16g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.2：

（6）煉苗移栽：生根一個月后,打開其瓶口,并灌入無菌水,以保證其水分供應，10天后取出生根苗洗凈根上所帶培養基,移栽到基質由泥炭土:珍珠巖:蛭石＝3:2:1組成的基質中，用留有透氣孔的薄膜覆蓋,放置在陰涼透氣的室內,18天將薄膜揭去,然后室外培養,隔天澆一次水,移栽35天后統計成活率。

本發明的優點是：以羅漢果種子為外植體，通過愈傷組織誘導、增殖、分化、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了羅漢果離體再植株，建立羅漢果組織培養快速繁殖技術體系，為節約栽培生產中的用種量,提高其藥材的產量及為羅漢果進一步開展遺傳轉化研究奠定基礎。

具體實施方式

以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

實施例1