[發明專利]L?蘇氨酸高產基因工程菌及其應用在審
| 申請號： | 201711098674.X | 申請日： | 2017-11-09 |
| 公開（公告）號： | CN107699525A | 公開（公告）日： | 2018-02-16 |
| 發明（設計）人： | 王健;郭群群;蘇躍穩;王森;張昕 | 申請（專利權）人： | 吉林大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N15/70;C12P13/08;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙)11617 | 代理人： | 栗華楠 |
| 地址： | 130022 吉林省長春市人民大*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蘇氨酸 高產 基因工程 及其 應用 | ||
1.一株生產L-蘇氨酸的基因工程菌，其特征在于，所述工程菌以大腸桿菌為宿主細胞，通過敲除編碼賴氨酸乙酰轉移酶的pka基因和TCA循環轉錄調控因子arcA基因的同時，過表達磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶編碼基因ppc構建的。
2.如權利要求1所述的一株生產L-蘇氨酸的基因工程菌，其特征在于，所述宿主細胞為E.coli THRD，保藏編號CGMCC No.11074。
3.如權利要求1所述的一株生產L-蘇氨酸的基因工程菌，其特征在于，所述pka基因其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述arcA基因其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；所述ppc基因其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示。
4.權利要求1所述的一株生產L-蘇氨酸的基因工程菌的構建方法，其特征在于，步驟如下：
(1)以E.coli THRD為出發菌株，敲除基因pka，篩選出成功敲除pka基因的菌株E.coli JLTHRG；
(2)再以菌株E.coli JLTHRG為基礎，敲除基因arcA，篩選出成功敲除pka基因和arcA基因的菌株E.coli JLTHRGQ；
(3)將來自大腸桿菌MG1655的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶編碼基因ppc與載體pDHK29連接，構建重組表達載體；
(4)將重組表達載體轉化至E.coli JLTHRGQ中，篩選出L-蘇氨酸生產菌E.coli JLTHRGQQ。
5.如權利要求4所述的一株生產L-蘇氨酸的基因工程菌的構建方法，其特征在于，通過Red同源重組技術敲除pka基因和arcA基因。
6.權利要求1所述的一株生產L-蘇氨酸的基因工程菌的應用。
7.權利要求6所述的生產L-蘇氨酸的基因工程菌的應用，其特征在于，用于發酵制備L-蘇氨酸方法，具體如下：
(1)將工程菌進行活化和種子培養：
(2)發酵培養
將種子液按15％接種量接種至發酵培養基中，通氣量初始值為1L/min，壓力為0.02Mpa，pH控制在7.0，溫度37℃，溶氧維持在20％-35％；發酵開始6小時后以脈沖方式流加含有2g/L甜菜堿鹽酸鹽的80％葡萄糖溶液，維持發酵體系中葡萄糖濃度0.5g/L直至發酵結束，總發酵時間30h。
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