[發明專利]綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體及構建方法和應用

有效

• 申請號: 201711095085.6
• 申請日: 2017-11-08
• 公開（公告）號: CN107760717B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 翟博;馬惠海;李旭;張明新;王春昕;武斌;趙云輝;曹陽;郎洪彥;趙卓
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66;C12Q1/66
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王闖

本發明涉及基因工程技術領域，具體而言，提供了一種綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體及構建方法和應用。本發明提供的綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體，含有雙熒光素酶報告基因載體和TNPO1基因的3’UTR區序列片段，該重組載體可以穩定表達綿羊TNPO1基因，作為一個生物模塊用于各種相關技術領域；本發明提供的構建方法操作簡便，可以通過篩選基因準確得到帶有目的基因的重組載體，并且重組載體可以穩定表達目的基因；本發明提供的重組載體可以用于檢測TNPO1基因表達活性，同時篩選得到靶向調控TNPO1基因的miRNA?21，miRNA?21負調控抑制TNPO1基因表達。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體而言，涉及一種綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體及構建方法和應用。

背景技術

TNPO1基因編碼具有多個結構域的轉運蛋白1(Transportin1)，Transportin1是轉運蛋白家族中的一個重要因子，研究表明，Transportin1在細胞核與細胞質轉運過程中發揮相當大的作用，在過去的幾年里，在核定位信號(NLSs)中作用的研究取得了很大的進展，使其成為多種生物學過程的分子基礎。NLSs可以通過Transportin1參與多種組織、結構和序列的變化。Transportin1除了上述作用外，還與細胞發育過程中的有絲分裂、纖毛活動及細胞質RNA粒化有關。有研究表明，Transportin1在特有蛋白進入纖毛過程中起到作用，并且最終發現TRN1存在于初級纖毛中。研究發現NLSs依賴于轉運蛋白突變引起蛋白錯配，引起肌萎縮外層硬化，說明轉運蛋白在人類健康中的重要性。

MicroRNA(即miRNA)是由18-25個核苷酸組成的一類內源性、短序列非編碼單鏈RNA，它由DNA轉錄產生，不翻譯蛋白質，通過和mRNA3'UTR區結合來調控目標基因的表達。miRNA主要是通過5'端被稱為種子序列的7nt序列與位于靶mRNA 3'UTR的miRNA調控元件相互作用以識別靶mRNA。作為一種轉錄后調控小分子RNA，在動物中主要通過與靶mRNA的3'UTR區特異性互補配對，抑制靶mRNA翻譯或引起靶mRNA的降解，從而參與調控細胞分化、組織發育、腫瘤發生發展等多種生命過程。成熟的miRNA可同時封閉多個靶基因的翻譯，干預調節miRNA可改變多個靶基因的表達水平，且干預調節效率很高。miRNA作為轉錄后基因調控的一種方式，在生物體內形成一個調控網絡，由于miRNA調控涉及的方便廣，調控控作用明顯，本身序列短，便于操作和研究，越來越受到人們對其生物學功能研究的重視。研究調控靶mRNA的miRNA對了解生物體內調控代謝機制具有重要意義。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體，本發明的第二目的在于提供上述綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體的構建方法，本發明的第三個目的在于提供上述綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體在檢測綿羊TNPO1基因表達活性中的應用，本發明的第四個目的在于提供綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體在篩選調控綿羊TNPO1基因的microRNA上的應用，本發明的第五個目的在于提供上述綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體在檢測microRNA調控綿羊TNPO1基因的調控機制中的應用，以緩解現有技術中對綿羊TNPO1基因的調控機制的研究內容和方法不完善的問題，提供一種綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體及構建方法，同時預測調控綿羊TNPO1基因的miRNA。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

本發明提供了一種綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體，所述綿羊TNPO1基因雙熒光素酶報告基因載體含有雙熒光素酶報告基因載體和TNPO1基因的3’UTR區核苷酸序列片段。

進一步地，所述雙熒光素酶報告基因載體為pmiR-RB-REPORT^TM。