[發明專利]一種熒光生物傳感器、制備方法及其檢測有機磷農藥的應用

有效

• 申請號: 201711094717.7
• 申請日: 2017-11-09
• 公開（公告）號: CN107937480B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 王廣鳳;陳紀華
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;G01N21/64
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

1.一種熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

1）、將PolyT30-DNA溶液加入緩沖溶液中，加入抗壞血酸鈉溶液，培養后，加入CuSO₄溶液，繼續培養；

2）、向步驟1）所得體系中加入酪氨酸酶溶液和有機磷農藥的混合溶液，培養，制備信號“打開”的熒光生物傳感器；

PolyT30-DNA溶液：緩沖溶液：抗壞血酸鈉溶液：CuSO₄溶液：酪氨酸酶溶液：有機磷農藥體積比為2:88:50:50:10；

所述PolyT30-DNA溶液濃度為1μM；

所述緩沖溶液為10mM MOPS(3-(N-嗎啉基)丙磺酸) PH=7.6的緩沖溶液；

所述抗壞血酸鈉溶液濃度為8.0 mM；

所述CuSO₄溶液濃度為800μM；

所述酪氨酸酶溶液濃度4U/mL；

所述有機磷農藥濃度0.1ng/L- 1000ng/L；

所述傳感器對有機磷農藥0.1ng/L- 1000ng/L有靈敏的檢測；

所述PolyT30-DNA序列為攜帶聚胸腺嘧啶的單鏈DNA序列： PolyT30：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1）中第一步培養為20℃-50℃培養5-10min，第二步培養是指在20℃-50℃培養10-30min。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1）具體為：將2μL的PolyT30-DNA溶液加入88μL的10mM MOPS(3-(N-嗎啉基)丙磺酸) PH=7.6的緩沖溶液中，然后加入50μL抗壞血酸溶液，37℃培養10min后，加入50μL的硫酸銅溶液，20℃-50℃培養10-30min。

4.根據權利要求1或3所述的制備方法，其特征在于，步驟2）所述培養為：20℃-50℃培養10-30min。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2）具體為：向步驟1)體系中加入10μL酪氨酸酶和有機磷農藥混合溶液，20℃-50℃培養10-30min。

6.一種采用權利要求1-5項任意一項所述的方法制備得到的熒光生物傳感器。

7.一種權利要求6所述的熒光生物傳感器檢測機磷農藥的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，具體檢測方法為：

1）、將PolyT30-DNA溶液加入緩沖溶液中，加入抗壞血酸鈉溶液，培養后，加入CuSO₄溶液，繼續培養；

2）、向步驟1）所得體系中分別加入酪氨酸酶溶液和不同濃度有機磷農藥的混合溶液，培養，不同濃度的有機磷熒光強度不同，構建線性關系，實現了對有機磷農藥檢測。