[發(fā)明專(zhuān)利]一種具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711094188.0
• 申請(qǐng)日: 2017-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107868136B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅巔輝;王昭晶;李志明;曹森;周容
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華僑大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/00
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 廈門(mén)市首創(chuàng)君合專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

1.一種具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)取石仙桃鱗莖部分，充分曬干后，稱取干燥的石仙桃鱗莖樣品放入蒸餾水中，該石仙桃鱗莖樣品與蒸餾水的質(zhì)量比為1∶28～32，恒溫水浴鍋92～95℃水浴提取2.5～4h，3000～4000r/min離心4～6min，去除雜質(zhì)，得到提取液；

(2)將步驟(1)所得的提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀65～75℃濃縮，待濃縮液冷卻至室溫后加入3～5倍體積無(wú)水乙醇，置于3～5℃冰箱內(nèi)保存10h以上，3000～4000r/min離心4～6min，棄上清，取沉淀；

(3)用蒸餾水溶解步驟(2)所得的沉淀，反復(fù)凍融，3000～4000r/min離心4～6min除去雜質(zhì)，然后置于真空冷凍干燥機(jī)干燥，得到第一粗提物，該步驟的反復(fù)凍融的條件為：冷凍溫度為-22～-18℃，溶解溫度為45～55℃，重復(fù)4～6次；

(4)取上述第一粗提物稱重，按照1∶24～27的質(zhì)量比充分溶解于蒸餾水中，按總體積1/4加入Sevage試劑，充分振蕩1.5～2.5h，3000～4000r/min離心8～15min，物料分三層，中間層是固體狀物質(zhì)，收集上層清液，然后對(duì)中間層和下層的物料重復(fù)該步驟進(jìn)行處理至中間層無(wú)固體狀游離蛋白為止，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)上述上層清液濃縮得濃縮液，在該濃縮液中加入3～5倍體積無(wú)水乙醇，3～5℃靜置過(guò)夜，然后3000～4000r/min離心4～6min離心取沉淀；

(5)用蒸餾水溶解步驟(4)所得的沉淀，反復(fù)凍融后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，采用截留分子量為3300～3800的透析袋流水透析20～25h，蒸餾水透析20～25h，冷凍干燥得到第二粗提物，該步驟的反復(fù)凍融的條件為：冷凍溫度為-22～-18℃，溶解溫度為45～55℃，重復(fù)4～6次；

(6)用DEAE-Sepharose CL-6B層析柱對(duì)第二粗體物進(jìn)行純化后，再經(jīng)過(guò)透析和冷凍干燥，得到所述石仙桃多糖；透析所用的透析袋的截留分子量為3300～3800。

2.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步驟(1)為：取石仙桃鱗莖部分，充分曬干后，稱取干燥的石仙桃鱗莖樣品放入蒸餾水中，該石仙桃鱗莖樣品與蒸餾水的質(zhì)量比為1∶30，恒溫水浴鍋95℃水浴提取3h，3500r/min離心5min，去除雜質(zhì)，得到提取液。

3.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步驟(2)為：將步驟(1)所得的提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀70℃濃縮，待濃縮液冷卻至室溫后加入4倍體積無(wú)水乙醇，置于4℃冰箱內(nèi)保存10h以上，3500r/min離心5min，棄上清，取沉淀。

4.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步驟(3)為：用蒸餾水溶解步驟(2)所得的沉淀，反復(fù)凍融，3500r/min離心5min除去雜質(zhì)，然后置于真空冷凍干燥機(jī)干燥，得到第一粗提物，該步驟的反復(fù)凍融的條件為：冷凍溫度為-20℃，溶解溫度為50℃，重復(fù)5次。

5.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步驟(4)為：取上述第一粗提物稱重，按照1∶25的質(zhì)量比充分溶解于蒸餾水中，按總體積1/4加入Sevage試劑，充分振蕩2h，3500r/min離心10min，物料分三層，中間層是固體狀物質(zhì)，收集上層清液，然后對(duì)中間層和下層的物料重復(fù)該步驟進(jìn)行處理至中間層無(wú)固體狀游離蛋白為止，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)上述上層清液濃縮得濃縮液，在該濃縮液中加入4倍體積無(wú)水乙醇，4℃靜置過(guò)夜，然后3500r/min離心5min取沉淀。

6.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步驟(5)為：用蒸餾水溶解步驟(4)所得的沉淀，反復(fù)凍融后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，采用截留分子量為3500的透析袋流水透析24h，蒸餾水透析24h，冷凍干燥得到第二粗提物，該步驟的反復(fù)凍融的條件為：冷凍溫度為-20℃，溶解溫度為50℃，重復(fù)5次。