[發明專利]病毒法檢測循環腫瘤細胞在胃癌療效評價和復發預測中的應用

在審

• 申請號: 201711090148.9
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN109750120A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 張文;張開泰;朱玉潔
• 申請（專利權）人: 張文;張開泰;朱玉潔
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;G01N15/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種經基因改造后能選擇性感染人的腫瘤細胞并能表達綠色熒光蛋白的重組單純皰疹病毒(簡稱HSVGFP)來檢測胃癌病人外周血中CTC的方法，是檢測胃癌循環腫瘤細胞的新型，快速，經濟的方法，為在早期提示惡性腫瘤的微轉移、監測術后復發與轉移、評估療效與預后提供支持。本發明應用與現行檢測方式相比，樣品獲得簡單，不易污染；其檢測不依賴于腫瘤特異標志物；且檢測到CTC為真正具有生物學活力的細胞。

技術領域

病毒法檢測循環腫瘤細胞在胃癌療效評價和復發預測中的應用。

背景技術

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，其發病率高，死亡率高，且預后較差，是常見的消化道惡性腫瘤，全球排名第四，死亡率居惡性腫瘤第二位。2012年全球新發病例約98.8萬例，死亡病例約73.6萬例。胃癌的致死原因主要源于腫瘤的復發與轉移。循環腫瘤細胞是存在于腫瘤患者外周血中的少量惡性腫瘤細胞，它與患者轉移復發關系密切，因此也是胃癌預后較差的關鍵因素之一。血行播散是腫瘤轉移的重要途徑，CTC(circulating tumourcell，CTC)是指由原發腫瘤或轉移灶釋放進入外周血循環的腫瘤細胞。越來越多的報道表明檢測到血中的循環腫瘤細胞能夠提示腫瘤轉移的情況和幫助判斷預后。研究發現，進入循環系統的CTC絕大多數在機體免疫識別及殺傷等作用下發生凋亡，只有極少數能存活下來，并在一定條件下發展為轉移灶。因此，在外周血中檢測到CTC并不意味著轉移灶已經存在。盡管如此，已有相關報道證實CTC與腫瘤(如乳腺癌、直腸癌等)臨床分期、腫瘤負荷、轉移以及治療反應有關。晚期腫瘤患者CTC的陽性率顯著高于早期腫瘤患者。但在無臨床轉移病灶的I期腫瘤中也可以檢測到CTC，提示我們在腫瘤患者的臨床早期就可能已有潛在轉移的可能。因此，CTC在早期提示惡性腫瘤的微轉移、監測術后復發與轉移、評估療效與預后以及目前相關學者提出的依據循環腫瘤細胞表型差異下的個體化治療等方面具有非常重要的意義。

隨著生物科技的發展，循環腫瘤細胞的檢測方法層出不窮，依據不同的原理出現了不同的方法，且不同方法的特異性和靈敏性也各不相同。根據檢測原理可分兩大類：細胞計數法(cytometric methods)和核酸檢測法(nucleic-acid based methods)。主要包括免疫細胞化學技術、流式細胞術、聚合酶鏈反應、逆轉錄聚合酶鏈反應及其各種改進的技術等。為了提高檢測的敏感性和特異性，近年來的文獻中多使用富集與檢測技術相結合的自動化檢測系統，目前使用最多的就是CellSearch檢測系統，在不同實驗室間也有很好的可重復性。但由于缺乏腫瘤特異性抗原，敏感度相對較低，會出現漏診，且檢驗費用較高，使其在臨床上的廣泛應用受到一定限制。此外該檢測方法對檢測所得陽性細胞的活力狀態不能進行區分，檢測所得的CTC可能處于無活性狀態即不具備增殖能力，此類CTC可能并不意味著會形成轉移灶，因此迫切需要研究新的檢測方法。

發明內容

本發明采用經基因改造后能選擇性感染人的腫瘤細胞并能表達綠色熒光蛋白的重組單純皰疹病毒(簡稱HSVGFP)來檢測胃癌病人外周血中CTC，是胃癌循環腫瘤細胞的新型，快速，經濟的方法，為在早期提示惡性腫瘤的微轉移、監測術后復發與轉移、評估療效與預后提供支持。