[發明專利]一種提高試劑穩定性的方法、及其穩定試劑

有效

• 申請號: 201711088834.2
• 申請日: 2017-11-08
• 公開（公告）號: CN107589109B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 姜敏
• 申請（專利權）人: 北京北檢·新創源生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/75
• 分類號: G01N21/75
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種提高試劑穩定性的方法、及其穩定試劑。本公開的試劑包含表面活性劑、蛋白穩定劑、和防腐劑的特定組合，從而有效改善NADH指示系統體外診斷試劑的熱穩定性、機載穩定性、運輸穩定性，可有效延長試劑盒的保存時間。

技術領域

本申請涉及生物化學和臨床檢驗領域。更具體而言，本申請涉及一種用于測定丙氨酸氨基轉移酶的試劑。

背景技術

丙氨酸氨基轉移酶(Alanineaminotransferase，ALT)主要存在于血液和相關組織中。細胞內濃度高于血清濃度1000至3000倍，只要有1％的肝組織發生破壞，就可以使血清中濃度升高1倍，被世界衛生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。測定ALT的活性對中毒性肝炎、病毒性肝炎、肝硬變活動期、肝癌、阻塞性黃疸、脂肪肝、膽管炎和膽囊炎、心肌梗塞、心肌炎、心血管疾病、骨骼肌疾病、內臟和肌肉炎癥性壞死等的診斷具有重要價值(《臨床肝病實驗診斷學》，ISBN9787802312470)。

ALT檢測方法眾多，國內過去多使用比色法檢測血液ALT，目前主要開展的為酶偶聯的連續檢測法(也作速率法)。目前ALT普遍采用各種大型全自動生化分析儀檢測。比色法操作簡單，不需要特殊的儀器和試劑，但結果不夠準確、重復性差。速率法結果準確，是公認的好方法，但是對儀器和試劑有一定的要求(于宏偉，唐貧初；速率法測定血清ALT及其試劑盒的配制，《南京軍醫學院學報》1999(1):12-14；丙酮酸氧化酶法測定ALT及其試劑盒的配制.倪星忠等人，上海醫學檢驗雜志1996)。

CN104404127A中公開了一種單試劑的丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑，其組成包括以下組分：50mmol/L Tris緩沖液pH＝7.8；500mmo1/L的L-丙氨酸；8g/L氯化鉀；10mmol/L的EDTA.Na2；6g/L海藻糖；6g/L牛血清白蛋白；6g/L二硫蘇糖醇；6g/L EMERGEN A-60；1ml/L的Proclin-300；15mmo1/L的α-酮戊二酸；1200U/L的乳酸脫氫酶；0.18mmo1/L的NADH。該試劑的7天37℃熱穩定性、以及15天的開瓶穩定性都優于對照組試劑。CN104404127A中選用了Tris-EDTA.Na₂緩沖體系，有效去除試劑中重金屬離子對NADH的干擾，二硫蘇糖醇和氯化鉀減緩了NADH在試劑中的衰減，提高了NADH的穩定性；同時試劑中還添加了BSA和EMERGEN A-60保護劑，能夠有效的提高了LDH生化試劑的穩定性。

CN106501514A中所公開的ALT檢測試劑盒加入酶保護劑、穩定劑，提高了丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒的穩定性。具體而言，CN106501514A公開了一種丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒，由試劑1和試劑2組成。其中，試劑1的組成和成份如下：120mmol/L-180mmol/LTris-HCl緩沖液PH＝8.4；650mmol/L-850mmol/L的L-丙氨酸；0.2mmol/L-0.4mmol/L NADH；2000U/L-3000U/L乳酸脫氫酶LDH；酶保護劑(0.5％-1.5％BSA、甘油、或葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖)；穩定劑(KCl和表面活性劑的組合物)；防腐劑。試劑2的組成和成份如下：60mmol/L-100mmol/L Tris-HCl緩沖液PH＝7.2；35mmol/L-55mmol/L的α-酮戊二酸；穩定劑(KCl和表面活性劑的組合物)；防腐劑。其中，所述的表面活性劑選自：Tween-20、Tween-80、曲拉通X-100、PEG 6000及PEG 8000中的一種或多種；0.5％-1.5％。CN106501514A中公開的試劑盒，于37℃中可穩定一周，代表2-8℃保存可以穩定一年。