[發明專利]豬流行性腹瀉、豬δ冠狀病毒二聯滅活疫苗以及其制備方法

有效

• 申請號: 201711087386.4
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN107875381B
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 董劍輝;陳瑞;張磊
• 申請（專利權）人: 陜西諾威利華生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種豬流行性腹瀉、豬δ冠狀病毒二聯滅活疫苗，其特征在于，所述二聯滅活疫苗中抗原成分在滅活前為豬流行性腹瀉病毒和豬δ冠狀病毒，其中，豬流行性腹瀉病毒的含量≥10^7.0TCID₅₀/mL、豬δ冠狀病毒的含量≥10^7.0TCID₅₀/mL；

所述豬流行性腹瀉病毒微生物保藏號是CGMCC No.12663；保藏時間是2016年08月23日；保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所；

所述豬δ冠狀病毒的微生物保藏號是CGMCC No.13853；保藏時間是2017年06月07日；保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所；

所述二聯滅活疫苗中含有佐劑，抗原與佐劑的質量比例為1:1；所述佐劑為MontanideISA 206佐劑；

所述二聯滅活疫苗是由豬流行性腹瀉病毒和豬δ冠狀病毒滅活后制備獲得，滅活后各個抗原的體積比例為1:1；

所述疫苗的制備過程包括以下步驟：

1) 豬流行性腹瀉病毒液制備：將長滿致密單層的Vero細胞，按0.2%劑量接種豬流行性腹瀉病毒，并加入含有胰酶的維持液，在37℃下培養；

2) 豬δ冠狀病毒液制備：將長滿致密單層的ST細胞，按2%劑量接種豬δ冠狀病毒，并加入含有胰酶的維持液，在37℃下培養；

3) 當細胞病變在80％以上時，分別收獲病毒，并反復凍融2次后，保存于-20℃以下備用；

4) 對收獲的病毒液進行病毒含量和無菌檢驗，將病毒含量在10^7.0TCID₅₀/mL以上、無菌檢驗合格的病毒液用于滅活；

5) 兩種病毒液分別用BEI滅活，滅活檢合格后，按照體積比例為1:1進行混合；

6) 與Montanide ISA 206佐劑按照質量比例為1:1乳化即可制成雙相油乳劑聯苗。

2.根據權利要求1 所述的二聯滅活疫苗，其特征在于，豬流行性腹瀉病毒和豬δ冠狀病毒的滅活是分別將病毒液按0.01mol/L的比例加入BEI，室溫條件下以300r/min磁力攪拌滅活12小時，滅活后按0.7%的體積比加入硫代硫酸鈉，繼續攪拌30分鐘后獲得。

3.根據權利要求1所述的豬流行性腹瀉、豬δ冠狀病毒二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述疫苗的制備過程包括以下步驟：

1) 豬流行性腹瀉病毒液制備：將長滿致密單層的Vero細胞，按0.2%劑量接種豬流行性腹瀉病毒，并加入含有胰酶的維持液，在37℃下培養；

2) 豬δ冠狀病毒液制備：將長滿致密單層的ST細胞，按2%劑量接種豬δ冠狀病毒，并加入含有胰酶的維持液，在37℃下培養；

3) 當細胞病變在80％以上時，分別收獲病毒，并反復凍融2次后，保存于-20℃以下備用；

4) 對收獲的病毒液進行病毒含量和無菌檢驗，將病毒含量在10^7.0TCID₅₀/mL以上、無菌檢驗合格的病毒液用于滅活；

5) 兩種病毒液分別用BEI滅活，滅活檢合格后，按照體積比例為1:1進行混合；

6) 與Montanide ISA 206佐劑按照質量比例為1:1乳化即可制成雙相油乳劑聯苗。

4.根據權利要求3所述的豬流行性腹瀉、豬δ冠狀病毒二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述的維持液為MEM培養基，含有100U/ml青霉素和100μg/ml的鏈霉素。