[發明專利]一種高純度尿促性素的提取制備方法

有效

• 申請號: 201711087199.6
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN107698676B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 胡著陽;魏超娟;徐富勇;萬偲;夏鑫水
• 申請（專利權）人: 江西浩然生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/22;C07K1/18
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

本發明提供一種高純度尿促性素的制備方法，該制備方法包括以下步驟：(1)人絕經期促性腺激素粗制品經過陰離子交換層析純化，得到高中間體I；(2)中間體I經過陽離子交換層析純化，得到中間體II；(3)中間體II經過染料親和層析純化，得到高純度尿促性素。本發明依次采用陰離子交換層析、陽離子交換層析、染料親和層析工藝，提取純化制得高純度HMG。經過陰離子交換層析與陽離子交換層析，HMG純化倍數可達60倍以上。利用FSH及LH能與染料親和吸附的性質，進一步去除雜質蛋白。經過3步層析工藝，使HMG純化倍數達到500倍以上，從而獲得高純度尿促性素，其中FSH與LH比例約為1:1。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種高純度尿促性素（High Purified HumanMenopausal Gonadotropin，HP-HMG）的提取制備方法。

背景技術

20世紀60年代人尿促性素（HMG）產品問世以來，就開始廣泛用于人類不孕癥的治療。此后，20年間它成為全世界范圍內不孕癥治療的主流。HMG中卵泡刺激素(FSH)和黃體生成激素(LH) 二者的比例為1:1。含有FSH 的第一代產品是尿促性素(HMG)，如Serono 公司的Pergonal，它是FSH與LH 比例約為1:1 的混合物。但是它的比活和純度都很低，比活一般在40-300IU/mg 蛋白，純度只有2-3％的有效成分，其余約97％都是雜蛋白。HMG在我國已應用多年，可獨立地作為促排卵治療的用藥， 一般用在排卵功能障礙用克羅米酚作為一線治療失敗的不孕癥婦女；也應用于低促性腺激素性性腺功能不全的男性和女性；還廣泛應用于行體外受精( invitro fertilization， IVF) 的控制性促排卵( controlled ova rianhyperstimulation, COH) 的婦女中。但同時它也有明顯的不足之處，如尿蛋白雜質多、尿源的污染、批間的不穩定性、過敏反應、不能皮下注射等。這就需要在輔助生育治療中使用更高純度和質量的HMG產品。

高純度的HMG（HP-HMG）是從天然提取的促性腺激素制劑，純度達到了重組單組分制劑的水平。HP-HMG相比于普通純度的HMG，應當具備純度高、雜質少的優點，基于這些優點，HP-HMG不會造成人體的過敏反應，且可以使用皮下注射，提高患者的順應性。

專利US7022822B1中公布了一種高純度HMG的制備方法，工藝為HMG粗品先用陽離子交換層析純化，再經陰離子交換層析，最后使用疏水層析技術。由于FSH與LH在疏水性質上差異較大，要同時純化兩者需要使用較強的洗脫條件，比如添加乙醇，才能將兩者同時洗脫，此洗脫條件會將疏水性介于FSH與LH中間的雜質蛋白洗脫，因此最終產品比活性只有4000IU/mg蛋白質左右。要制備更高純度的HMG，需要開發使用更有效的分離技術，將FSH與LH同時純化，使其達到最終的1:1比例，同時，盡量去除雜質蛋白。

發明內容

本發明的目的是提供一種高純度尿促性素的提取制備方法，本方法操作簡便、生產成本低，對原料的要求低，工業適應性強，獲得的HP-HMG純度更高，卵泡刺激素（FollicleStimulating Hormone，FSH）與黃體生成素（Luteotropic Hormone，LH）的比例接近1:1。 高純度尿促性素比活性以FSH計，大于8000IU/mg 蛋白質，FSH:LH約為1:1。

本發明采用的技術方案如下：一種高純度尿促性素的提取制備方法，制備方法包括以下步驟：

(1) 人絕經期促性腺激素（Human Menopausal Gonadotropin，HMG）粗制品經陰離子交換層析純化，得到中間體I；

(2) 中間體I經陽離子交換層析純化，得到中間體II；

(3) 中間體II經染料親和層析純化，得到高純度尿促性素溶液。