[發明專利]一種蔓長春花的組織培養及繁殖方法

有效

• 申請號: 201711083889.4
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN107667863B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 鄒克琴;李素芳;朱敏
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 陸永強

1.一種蔓長春花(Vinca.major Linn)組織培養及繁殖方法，其特征在于所述方法按如下步驟進行：

(1)無菌材料的獲得及誘導培養：切取長勢良好、無病蟲害的蔓長春花幼嫩的莖尖，用自來水沖洗30～60min，然后在體積濃度為1％洗潔精的水溶液中振搖2～5min，用無菌水沖凈；在超凈工作臺上用體積濃度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡10～20min，再用無菌水沖洗3～5遍；在滅菌的濾紙上吸干水分，剝取0.3～0.6mm的腋芽尖，然后將腋芽尖接種到裝叢生芽誘導培養基的培養瓶中，蓋上瓶蓋并用封口膜封住瓶口，置于培養箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx條件下培養15～25天；所述混合消毒液為體積比1：200的吐溫20和84消毒液的混合液；所述叢生芽誘導培養基為添加KT0.1～0.5mg/L、6-BA0.5～2.0mg/L、NAA 0.05～1.0mg/L和谷氨酰胺50～100mg/L的MS基本培養基；

(2)芽的增殖：觀察步驟(1)所述24～26℃，光照1500～2500lx條件下培養5～15天后，切口部位出現綠色突起，20～40天后出現叢生芽，再培養10～20天，當叢生芽長到2～4cm時，將叢生芽切下轉接到芽增殖培養基中，在24～26℃，光照1500～2500lx條件下進行增殖培養，獲得叢生苗；所述芽增殖培養基為添加KT 0.1～0.5mg/L、6-BA 0.5～2.0mg/L、NAA0.05～1.0mg/L、脯氨酸200～800mg/L和谷氨酰胺50～100mg/L的MS基本培養基；

(3)生根培養：將分化的叢生苗從基部切下，插入生根培養基中培養至芽生根，所述的生根培養基為改良的1/2MS培養基中加入0.05mg/L～0.2mg/L的NAA和50mg/L～100mg/L的谷氨酰胺；所述生根培養的改良的1/2MS培養基是指大量元素、微量元素和鐵鹽的含量均降低為1/2的含量，不添加有機物，即終濃度組成為：NH₄NO₃ 0.83克/升、KNO₃0.95克/升、CaCl₂·2H₂O 0.22克/升、MgSO₄·7H₂O 0.19克/升、KH₂PO₄ 0.09克/升、KI 0.42毫克/升、H₃BO₃ 3.1毫克/升、MnSO₄·4H₂O 11.2毫克/升、ZnSO₄·7H₂O 4.3毫克/升、Na₂MoO₄·2H₂O0.13毫克/升、CuSO₄·5H₂O 0.013毫克/升、CoCl₂·6H₂O 0.013毫克/升、Na₂EDTA 18.7毫克/升、FeSO₄·7H₂O 13.9毫克/升、蔗糖30克/升、瓊脂粉9克/升，溶劑為水，pH為5.6～6.0；

(4)生根苗移栽：待小苗葉片舒展，葉色濃綠，苗高3-5cm時，打開瓶蓋煉苗2～4天后，將小苗植株上的瓊脂和雜物洗凈，移栽至消毒后的育苗基質上，澆透水，蓋上薄膜，保持濕度80％以上，置通風陰涼處，在24～26℃、光照1500～2500lx條件下培養8～12d；所述育苗基質為細沙、腐殖土與谷糠灰按照質量比5：2：2的比例配制而成，所述育苗基質的消毒方法為：采用體積濃度0.5％福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋3～5天后揭開薄膜再曝曬基質1～3天，完成對育苗基質的消毒，或者采用體積濃度0.5％福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋3～5天后揭開薄膜再在60℃下干燥2天，完成對育苗基質的消毒。

2.如權利要求1所述蔓長春花組織培養及繁殖方法，其特征在于步驟(1)所述叢生芽誘導培養基為添加KT 0.2mg/L、6-BA 1.0mg/L、NAA 0.5mg/L和谷氨酰胺80mg/L的MS基本培養基。