[發明專利]一種臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導培養基和誘導方法

有效

• 申請號: 201711081393.3
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107630003B
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發明（設計）人: 魏偉;嵐山芮;王雅茹
• 申請（專利權）人: 廣州市天河諾亞生物工程有限公司;廣州瑞鉑茵健康科技有限公司
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N5/0793
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導培養基和誘導方法。本發明提供了一種臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導培養基、誘導方法，所述誘導培養基包括白皮杉醇、基本培養基，所述白皮杉醇在誘導培養基中的濃度為62.5～250μmol/L；所述誘導方法為將臍帶間充質干細胞用上述誘導培養基培養，定向分化得到神經樣細胞。本發明提供的方法誘導時間短，且可誘導產生神經元和神經膠質混合的神經樣細胞，為中樞神經系統的損傷修復提供一種新的細胞來源。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導培養基和誘導方法。

背景技術

神經系統疾病嚴重的威脅著人類的身體健康，如眾所周知的帕金森病和阿爾茨海默癥，以及出血性腦中風、創傷疾病和脊髓損傷等均是由于分化成熟的神經細胞不能分裂增殖以彌補損傷和死亡的細胞造成的。目前，治療神經系統疾病的方法多為自體神經移植，但自體神經移植存在著來源有限，因此尋找其他來源的細胞是進行神經系統疾病細胞移植和治療的關鍵所在。

間充質干細胞(mesenchymal stem cell,MSCs)是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，在特定條件下能夠向成骨細胞、神經細胞、脂肪細胞、心肌細胞、肌肉細胞、軟骨細胞等分化。間充質干細胞是來源于發育早期中胚層的成體干細胞，在細胞替代治療和組織工程學方面具有很大的應用價值。間充質干細胞可在骨髓、臍帶、皮膚、肌肉、外周血等組織中分離獲得，其中人臍帶來源的間充質干細胞與其他來源的間充質干細胞相比，臍帶的成本較低免疫原性低且來源沒有倫理學爭議。

中藥是我國的國粹，在治病強身方面有著神奇的治療已被世界認可。有些中藥在治療神經系統疾病方面有著很好的優勢。目前還沒有白皮杉醇使得間充質干細胞定向分化為神經樣細胞的報道。中藥提取物白皮杉醇是一種在葡萄、甘蔗等中發現的多酚物質，具有較強的抗氧化作用，并具有一定的神經系統保護作用。

發明內容

為了克服現有技術的缺點和不足，本發明提供了臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導培養基和誘導方法。

另外，本發明還提供了一種白皮杉醇或上述誘導培養基在誘導臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞中的應用。

為了實現上述目的，本發明提供了以下技術方案：

一種臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導培養基，所述誘導培養基包括白皮杉醇、基本培養基。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述白皮杉醇在誘導培養基中的濃度為62.5～250μmol/L。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述白皮杉醇在誘導培養基中的濃度為62.5μmol/L、125μmol/L或250μmol/L。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述基本培養基為L-DMEM培養基、MEM培養基或RPMI1640培養基中的一種。

一種臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導方法，包括以下步驟：將臍帶間充質干細胞用上述所述誘導培養基培養，定向分化得到神經樣細胞。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述培養的時間0.5～6小時。

所述的神經樣細胞為神經元和神經膠質的混合神經樣細胞

作為對上述技術方案的進一步改進，所述臍帶間充質干細胞分化為神經樣細胞的誘導方法，包括以下步驟：

(1)取用間充質干細胞培養基培養中的hUC-MSCs，棄去間充質干細胞培養基，加生理鹽水沖洗，用胰酶消化液消化，加培養基終止消化，離心，棄去上清，加入間充質干細胞培養基重懸細胞；

(2)將細胞傳至經多聚賴氨酸包被含有消毒蓋玻片的六孔板內，待細胞達到60～70％融合度時，換成含白皮杉醇的培養基。