[發明專利]一種E型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗的制備方法有效
| 申請號： | 201711076893.8 | 申請日： | 2017-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN107875377B | 公開（公告）日： | 2020-01-03 |
| 發明（設計）人： | 柴同杰;馬連營;郭夢嬌;蔡玉梅 | 申請（專利權）人： | 山東農業大學 |
| 主分類號： | A61K39/08 | 分類號： | A61K39/08;A61K39/39;A61P31/04;A61P1/12 |
| 代理公司： | 37240 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) | 代理人： | 李茜 |
| 地址： | 271000 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 型產氣 莢膜 菌類 毒素 疫苗 制備 方法 | ||
1.一種E型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將E型產氣莢膜梭菌菌種接種于無菌血平皿培養基上，厭氧培養，進行菌株的復蘇；
(2)將復蘇后的E型產氣莢膜梭菌菌種接種于液體硫乙醇酸鹽流體培養基中，厭氧條件下進行増菌，制得種子液；
(3)將種子液接種于產毒培養基中，厭氧培養，過濾除菌，制備得到外毒素液；
(4)將制備的外毒素液經滅活、乳化處理，再加入硫柳汞，即制備得到E型產氣莢膜梭菌類毒素疫苗；
步驟(1)中，所述無菌血平皿培養基由如下方法制備而成：
將3.8g血瓊脂基礎，1g葡萄糖，溶于100mL的去離子水中，121℃，15min高壓滅菌，冷卻至50℃，加入5mL脫纖維綿羊血，搖晃均勻，傾入滅菌的平皿，即得；
步驟(3)中，所述產毒培養基由如下方法制備而成：
2g蛋白胨，1g糊精，2g酵母提取物，1.2g L-精氨酸溶于100mL PBS緩沖液，用濃鹽酸調pH為7.5，高壓滅菌，即得；
厭氧培養時，厭氧條件的氣體構成按體積分數為：88％N2、5％CO2、7％H2；
步驟(4)中，滅活采用的方法為：向外毒素液中加入甲醛，使其終濃度為0.3％，置于37℃，充分振蕩，轉速為140rmp，滅活24h。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，厭氧培養的溫度為37℃，厭氧培養的時間為36h。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，41℃厭氧培養18h進行増菌。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，厭氧培養的條件為：43℃厭氧振蕩培養6h。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，向滅活后的外毒素液中加入白油佐劑進行乳化，外毒素液與白油佐劑加入的體積比為1:2。
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