[發明專利]一種環肽類化合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711076577.0
• 申請日: 2016-06-24
• 公開（公告）號: CN107746427B
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 劉繼東;唐海;宋少江;楊宇春
• 申請（專利權）人: 沈陽興齊眼藥股份有限公司
• 主分類號: C07K5/12
• 分類號: C07K5/12;C07K1/02;C07K1/16;C07K1/06;A61K38/12;A61P29/00;A61P31/04
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 崔婧;劉海羅

1.一種環肽類化合物，由亮氨酸組成，化學通式為環-leu-[leu]_n-，其特征在于，所述環肽類化合物中亮氨酸以肽鍵相互連接成環，n為2，構成環三肽，結構式為：

2.一種權利要求1所述的環肽類化合物的提取方法，其特征在于，由以下步驟組成：

1)取魚腥草全草粉碎，用水蒸汽蒸餾法得揮發油粗品，再用乙醚溶解，加硫酸溶液萃取多次，合并上層有機相，得到混合溶液；

2)向混合溶液中加氫氧化鈉溶液萃取多次，合并下層水相，再加硫酸溶液和乙醚萃取多次，合并上層有機相，減壓蒸去溶劑即得魚腥草揮發油；

3)將魚腥草揮發油進行快速減壓柱色譜或常壓柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，每固定體積為一餾分，收集多個餾分，經硅膠薄層層析檢識，合并餾分；餾分經正相制備高效液相色譜等度洗脫分離得到多個餾分，所述等度洗脫餾分經反相制備高效液相色譜梯度洗脫分離，去除溶劑得到所述環肽類化合物。

3.如權利要求2所述提取方法，其特征在于，由以下步驟組成：

1)取魚腥草全草6000g，用水蒸汽蒸餾法加熱2～5小時，得揮發油粗品，再用20～50倍乙醚溶解，置分液漏斗中加濃度8％～15％硫酸20～30ml萃取1～5次，取上層有機相，得到混合溶液；

2)向混合溶液中加質量體積分數1％～3％氫氧化鈉溶液20～30ml萃取1～5次，取下層水相，再加濃度8％～15％硫酸20～30ml與相較揮發油粗品20～50倍的乙醚萃取1～5次，取上層有機相，減壓蒸干溶劑即得揮發油樣品100～300g；

3)揮發油樣品進行快速減壓柱色譜或常壓柱色譜分離，所述石油醚的沸程為30～60℃或60～90℃，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶劑分別為體積比100:1、50:1、30:1、20:1、0:1五種流動相,分別逐次進行洗脫，柱子填料為200-300目柱層析凝膠，每300～500ml體積為一餾分，共收集到40～60個餾分，經硅膠薄層層析檢識，合并得到5個餾分；5個餾分分別進行生物活性測試，選用活性最高的餾分經正相制備高效液相色譜正己烷-異丙醇等度洗脫，正己烷-異丙醇體積比為0.35％:1，流速1-3ml/min分離，色譜柱為安捷倫ZORBAX,9.4×250mm,5μm；得到8個餾分，8個餾分分別進行生物活性測試，選用活性最高的餾分經反相制備高效液相色譜進行梯度洗脫，所述反相制備高效液相色譜的流動相為乙腈和水，洗脫流程為：0min，乙腈：水的體積比20％：80％到30min，乙腈：水為100％：0，流速0.5-1.5ml/min,柱子為Thermo C18ODS柱，旋轉蒸發去除溶劑，得到環肽類化合物。

4.一種權利要求1所述的環肽類化合物的合成方法，其特征在于，由以下步驟組成：

a)L-亮氨酸和Boc-亮氨酸為初始原料合成保護型二肽；

b)在步驟a)保護型二肽基礎上，再與一分子Boc-亮氨酸合成保護型三肽；

c)將步驟b)所述的保護型三肽進一步脫去Boc保護基和甲酯保護基，在縮合劑的作用下，合成所述環肽類化合物。

5.如權利要求4所述的合成方法，其特征在于，由以下步驟組成：

a)L-亮氨酸與甲醇和氯化亞砜在低溫下反應成亮氨酸甲酯鹽酸鹽，亮氨酸甲酯鹽酸鹽與Boc-亮氨酸以DIEA為縛酸劑，DCC與HOBT為混合縮合劑，二氯甲烷為溶劑縮合成保護型二肽；

b)保護型二肽在三氟乙酸與二氯甲烷的體積比1:4的作用下脫掉Boc-保護基，生成二肽的三氟乙酸鹽；在低溫的條件下，以DIEA為縛酸劑，DCC與HOBT為混合縮合劑，二氯甲烷為溶劑，二肽的三氟乙酸鹽與Boc-亮氨酸縮合成保護型的三肽；

c)上步的保護型三肽再在三氟乙酸與二氯甲烷的體積比1:4的作用下脫掉Boc-保護基；脫去Boc-保護基的三肽甲酯在氫氧化鈉和水的體積比1:1的作用下脫去甲酯保護，生成三肽，三肽再在HATU與PyBOP縮合劑的存在下，以DIEA為縛酸劑，以四氫呋喃和二氯甲烷為溶劑，縮合成環三肽，得到所述環肽類化合物。

6.權利要求1所述的環肽類化合物在制備治療炎癥或細菌性疾病的藥物中的應用。