[發(fā)明專利]一種從葛根中提取葛根活性物質(zhì)的生物制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711075574.5
• 申請日: 2017-11-06
• 公開（公告）號: CN107619838A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易有金;田莞爾;聶燦華
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;A23L33/105;A23L2/38;C12R1/645
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司43113
• 代理人: 何為,袁穎華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種葛根粗提物的提取方法，具體涉及一種以保藏號為CCTCC NO：M 2015379的金花菌冠突散囊菌(EurotiumCristatum)LS1菌株為發(fā)酵菌株，以低淀粉含量的葛根地上部分的基部膨大莖、葛根皮及葛根塊莖的兩端切塊為原料提取葛根粗提物的生物方法。

背景技術(shù)

葛根為藥食兼?zhèn)涞闹参铮蚝?2％左右的黃酮類物質(zhì)，而素有“亞洲人參”之稱，具有改善腦部血液循環(huán)之效，對因高血壓引起的頭痛、眩暈、耳鳴及腰酸腿痛等癥狀有較好的緩解功效，經(jīng)常飲用葛根茶對治療高血壓具有明顯的療效。

生物轉(zhuǎn)化提取是利用微生物代謝過程中產(chǎn)生的酶使底物進(jìn)行反應(yīng)，具有安全有效、低成本、低耗能等優(yōu)點(diǎn)。微生物特別是真菌具有非常強(qiáng)大的分解轉(zhuǎn)化能力，并能產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物。近年來已有大量研究證明，生物轉(zhuǎn)化葛根的可行性，例如米根霉和酵母混合菌發(fā)酵提取的葛根異黃酮含量明顯高于傳統(tǒng)提取方法(劉改霞的葛根異黃酮的發(fā)酵提取工藝及其抗氧化性研究，南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2010年)；添加葛根的靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對羥自由基和超氧陰離子的清除效果明顯比單獨(dú)靈芝發(fā)酵好；利用紅曲霉轉(zhuǎn)化葛根可使染料木素與葛根素含量得到提高。

冠突散囊菌(EurotiumCristatum)又名“金花”菌，是茯磚茶渥堆過程中的優(yōu)勢菌，具有多種醫(yī)療保健功能，如降脂減肥、抗氧化、抗菌、抗癌等，它可利用單寧與淀粉等物質(zhì)作為碳源，分泌多種胞外酶，如多酚氧化酶、果膠酶、纖維素酶、蛋白酶等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種從葛根中提取葛根活性物質(zhì)的生物制備方法，該方法利用低淀粉含量的葛根地上部分的基部膨大莖、葛根皮、葛根塊莖的兩端切塊為原料，經(jīng)微生物發(fā)酵后進(jìn)行提取，所制備的葛根粗提物可用于進(jìn)一步制備口服液或沖泡飲料，將為開發(fā)葛根利用提供新的思路。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種從葛根中提取葛根活性物質(zhì)的生物制備方法，該方法步驟如下：

(1)取葛根中低淀粉含量部分洗凈，切成薄片，瀝干表面水后置于滅菌鍋中于120℃-125℃干蒸60-120min；

(2)將干蒸后的葛根片干燥至含水量為15％-20％，然后粉碎為綠豆大小的顆粒；

(3)于葛根粒中加入為葛根粒重量1％-3％的金花菌粉，混勻，密封，于25-35℃發(fā)酵10-15天；

(4)于發(fā)酵后的葛根粒加入至少為葛根粒重量3倍(最好為3-5倍)的1％質(zhì)量濃度的檸檬酸水溶液浸泡4-8小時(shí)；

(5)將浸泡后的葛根粒與檸檬酸的混合物置于提取罐中，于80-90℃提取4-6小時(shí)，過濾，濾液備用；濾渣加入至少為濾渣重量3倍(最好為3-5倍)的1％質(zhì)量濃度的檸檬酸水溶液，于80-90℃提取2-3小時(shí)，過濾，濾液備用，濾渣重復(fù)提取1次；合并3次濾液，濃縮至未發(fā)酵葛根粒重量的1/3，即得葛根活性物質(zhì)；

其中，上述金花菌粉是以葛根作為培養(yǎng)基質(zhì)，按1kg培養(yǎng)基質(zhì)加15-20mL金花菌孢子接種液的比例加入金花菌孢子接種液，于26-30℃發(fā)酵5-7d，再于30-32℃發(fā)酵3-5天，將發(fā)酵產(chǎn)物拌勻，干燥至含水量為5-8％，過80-100目篩，即得；其中，上述金花菌孢子接種液是以保藏號CCTCC NO：M 2015379的金花菌冠突散囊菌(EurotiumCristatum)LS1菌株作為發(fā)酵菌株制得的發(fā)酵濾液。

上述提及的葛根中低淀粉含量部分為葛根地上部分的基部膨大莖、葛根皮和葛根塊莖的兩端切塊。

上述步驟(2)中干燥的溫度為60℃-70℃。上述步驟(5)中的濃縮溫度為100-120℃。

上述金花菌粉制作中以葛根作為培養(yǎng)基質(zhì)中培養(yǎng)基質(zhì)的具體制備為：取葛根洗凈、粉碎，加入為葛根重量25-35％的無菌水，充分混勻成培養(yǎng)基質(zhì)，于80-100℃干燥1-1.5h，冷卻至40-50℃，再于80-100℃干燥1h。

上述提及的金花菌孢子接種液是將金花菌LS1菌株在無菌條件下接種于含改良PDA培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，接種量為10％，于28-30℃培養(yǎng)6-8d，再以160-200rpm/min振蕩培養(yǎng)瓶18-22min，過濾除去菌絲，即得。所制得的金花菌孢子接種液的濃度為4.5×10⁸-5×10⁹個(gè)/mL。其中，該改良PDA培養(yǎng)液是取馬鈴薯300g，加水煮20min，過濾，于濾液中加入葛根40g后煮沸，5min后過濾,所得濾液加入葡萄糖20g后補(bǔ)水至1000mL制得。