[發明專利]一種檢測組織中氯霉素的免疫膠體檢測卡

在審

• 申請號: 201711074452.4
• 申請日: 2017-11-05
• 公開（公告）號: CN109752535A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 洪霞;杜霞;袁超
• 申請（專利權）人: 鎮江華維檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明氯霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，涉及動物源食品獸藥殘留檢測技術領域。本發明的檢測卡外殼中的試紙條，由PVC膠板、樣品墊、膠體金結合墊、包被膜和吸水墊組成；膠體金膜為含氯霉素單克隆抗體的玻璃纖維素膜，包被膜是硝酸纖維素膜，其上設有T線和C線，T線包被有氯霉素蛋白質偶聯物，C線包被有羊抗鼠IgG抗體。本發明有效用于快速檢測氯霉素，方便、快捷、結果準確。

技術領域

本發明涉及谷物食品中農藥殘留檢測技術領域，特別是涉及氯霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法。

背景技術

氯霉素是一種廣譜抗生素，常用于動物各種傳染病的治療，對于多種病原菌有較強的抑制作用。氯霉素存在嚴重的副作用，能抑制人體骨髓造血功能，引起人類的再生障礙性貧血等疾病，因此動物食品中的氯霉素殘留對人類的健康構成巨大威脅。

目前有關動物源性食品中氯霉素及其代謝物的測定方法主要為理化檢測法，如用化學分析法測定蝦肉中 的氯霉素殘留量，檢出限為0.0125ug/kg，用高效液相色譜法測定魚肉中的氯霉素殘留量，檢出限為0.0125ug/kg。但這些方法儀器設備昂貴，操作復雜，靈敏度低，且不適 用于大批量樣品的檢測，無法滿足國內食品安全檢測市場的迫切需要。

免疫分析技術以其抗原抗體反應的高度專一性，以及測定方法簡單、快速、靈敏度高、費用低和適于現場大批量樣品篩選等優點，在農獸藥殘留分析中展示了廣泛的應用前景。隨著農藥殘留免疫學檢測技術不斷被完善和商品化，免疫學檢測技術會成為食品農獸藥殘留和食品安全質量控制的有效快速檢測手段。基于目前獸藥殘留診斷試劑的研究現狀，及時開發出優于目前的、快速靈敏的檢測試劑可謂是當務之急。雖然農獸藥殘留分析的方法雖然有很多，但是利用免疫學技術進行分析是特異性最好、檢測時間最短的方法。

現有技術對于氯霉素的檢測主要是氣相色譜-質譜法、高效液相色譜法等檢測方法，但這些技術的缺陷明顯：設備昂貴、操作復雜、難以推廣。所以，建立一種簡單、有效、適合基層使用的測定方法是極其必要的。本發明的目的是研制一種更適合企業進行現場檢測且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

發明內容

針對以上情況，本發明的目的就是為了克服現有技術存在的缺陷而提供一種氯霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡便地檢測出氯霉素的問題。

本發明的氯霉素膠體金檢測卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標記物的膠體金結合墊、包被了氯霉素-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。

本發明的氯霉素膠體金檢測卡的制備方法，是由以下步驟實現：

(1)膠體金溶液制備：取1 L 三角燒瓶1個，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，繼續攪拌加熱，當溶液的顏色完全變為透明的紫紅色時，維持5 min后停止加熱，補水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存備用；

(2)抗體的預處理：將要標記的氯霉素抗體在1000 r/min, 4℃條件下，離心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過0.22 μm濾膜；