[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)果蔬中保鮮劑鄰苯基苯酚的試劑盒的制備

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711073646.2
• 申請(qǐng)日: 2017-11-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109752521A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 洪霞;杜霞;袁超
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/53
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

一種檢測(cè)鄰苯基苯酚的試劑盒及其檢測(cè)方法用于對(duì)蘋(píng)果中鄰苯基苯酚含量的檢測(cè)。本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被鄰苯基苯酚抗原，樣本中鄰苯基苯酚和此抗原競(jìng)爭(zhēng)抗鄰苯基苯酚抗體（抗試劑），同時(shí)抗鄰苯基苯酚抗體與酶標(biāo)二抗（酶標(biāo)物）相結(jié)合，經(jīng)TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的鄰苯基苯酚成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中鄰苯基苯酚的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

一種快速高效檢測(cè)食品中鄰苯基苯酚的酶聯(lián)免疫試劑盒及其檢測(cè)方法，屬于酶聯(lián)免疫分析 (ELISA) 技術(shù)領(lǐng)域，主要用于食品中鄰苯基苯酚殘留的檢測(cè)。

背景技術(shù)

食品安全衛(wèi)生關(guān)系到人類(lèi)的生命和健康，引起了國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注。隨著食品生產(chǎn)自然方式的減少，工業(yè)化比重的增加，食品被人們故意或非故意污染的機(jī)會(huì)正逐漸增加，而且隨著國(guó)際貿(mào)易的日益發(fā)達(dá)，食品污染擴(kuò)散的速度之快、范圍之廣、危害之大，也是前所未有的?，F(xiàn)在的果蔬保鮮貯藏技術(shù)，主要是依靠適宜的低溫和空氣調(diào)節(jié)，但在果蔬貯藏期間它們能夠承受的溫使用度和氣體條件下，控制不住霉菌的生長(zhǎng)；另外果蔬保鮮貯藏需要的較高濕度，正式霉菌生長(zhǎng)的良好條件，因此在果蔬保鮮中使用防腐劑是必不可少的。防腐劑不但對(duì)果蔬保鮮有利，而且它也可控制產(chǎn)生霉菌，從而使人們免受霉菌毒素的侵害。

防腐劑的使用對(duì)食品貯藏具有重要意義。但在食品中使用化學(xué)品難免讓人們擔(dān)心，防腐劑能殺菌，同時(shí)對(duì)人體也有害處。人們對(duì)于在食品中使用化學(xué)品，尤其是使用防腐劑很擔(dān)心，但在實(shí)際上不使用又不行，防腐劑成了一把雙刃劍。為此，有關(guān)專(zhuān)家提出幾點(diǎn)建議，其中一點(diǎn)要嚴(yán)格執(zhí)行GB2760中規(guī)定的最高使用限量和最高殘留限量，選擇合適的劑量，最大限度地提高藥效，從而減少使用量，將污染降至最低水平。這就需要發(fā)展相應(yīng)的檢測(cè)方法，快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出果蔬中殘留的防腐劑，給消費(fèi)者提供最大限度的博阿胡。防腐劑在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，由于微生物種類(lèi)的多樣性和防腐劑作用的特點(diǎn)，人們致力加強(qiáng)復(fù)配技術(shù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，采用多種保鮮劑的混合應(yīng)用。因此，需要發(fā)展同時(shí)測(cè)定果蔬中多種保鮮劑的分析方法，提高分析時(shí)間和材料方面效率。在世界各國(guó)廣泛使用，防止水果在生長(zhǎng)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸過(guò)程中腐爛變質(zhì)。但水果中殘留的防腐劑對(duì)人體具有一定的毒性，主要侵害人體的肝腎、神經(jīng)系統(tǒng)和骨髓。有文獻(xiàn)報(bào)道鄰苯基苯酚對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物具有潛在的致膀胱癌作用。因此，需要發(fā)明一種工序少、操作簡(jiǎn)便檢測(cè)的新方法。因此，需要發(fā)明一種工序少、操作簡(jiǎn)便檢測(cè)的新方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，廉價(jià)，方便攜帶的檢測(cè)鄰苯基苯酚的試劑盒。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是克服其他方法的一些不足，從而提供一種樣品前處理簡(jiǎn)單，提取后就可直接測(cè)定，不需要進(jìn)化過(guò)程，一次可測(cè)定大量樣本，而且簡(jiǎn)便，快速，靈敏，準(zhǔn)確，廉價(jià)的檢測(cè)鄰苯基苯酚的方法。

本發(fā)明試劑盒主要由盒體，酶標(biāo)板一塊，標(biāo)準(zhǔn)液6瓶（1 mL/瓶）：0ppb； 0.6ppb；1.8ppb；5.4ppb；16.2ppb；48.6ppb，酶標(biāo)物1瓶（6 mL），顯色液Ａ（6 mL），顯色液Ｂ（6 mL），終止液（6 mL）濃縮洗滌液10×（40mL），濃縮樣品稀釋液5×（20 mL），海綿托架所組成。海綿托架內(nèi)裝有試劑瓶，海綿托架和酶標(biāo)板均安裝在盒體內(nèi)。

本發(fā)明主要采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）競(jìng)爭(zhēng)法來(lái)檢測(cè)鄰苯基苯酚。

制備針對(duì)鄰苯基苯酚的單克隆抗體：

1．免疫動(dòng)物：采用小劑量長(zhǎng)周期的免疫方案。對(duì)6～8周齡的雌性BALB/c小鼠，體重18～20g，首次免疫用100μg鄰苯基苯酚-小牛血清白蛋白(BSA)與等量完全福氏佐劑混勻，腹腔注射。2周后，用50μg鄰苯基苯酚-BSA與等量不完全福氏佐劑混勻后，腹腔注射。此后每隔2周用50μg鄰苯基苯酚-BSA與等量不完全福氏佐劑混勻，腹腔注射。8周后脾內(nèi)免疫50μg鄰苯基苯酚-BSA作為加強(qiáng)免疫，3d后取脾細(xì)胞進(jìn)行融合。