[發(fā)明專利]檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間分辨熒光免疫試劑盒及其檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711073635.4
• 申請(qǐng)日: 2017-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN109752552A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜霞;洪霞;丁炎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間熒光分辨熒光免疫分析試劑盒及其檢測(cè)方法。所述檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)試劑盒是由多孔包被板、緩沖液、聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品、聯(lián)苯的抗體凍干品、銪標(biāo)記的羊抗鼠抗體、洗滌液和增強(qiáng)液所組成。所述檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間熒光免疫分析試劑盒的檢測(cè)方法包括下列步驟：(1)免疫原的制備；(2)包被原的制備；(3)單克隆抗體的制備；(4)樣品的前處理及檢測(cè)。本發(fā)明檢測(cè)時(shí)間短、平均回收率高、樣品前處理簡(jiǎn)單、能現(xiàn)場(chǎng)操作檢測(cè)，應(yīng)用廣泛，檢測(cè)成本低，同時(shí)具有檢測(cè)特異性強(qiáng)，批內(nèi)和批間差異小、靈敏度高和操作簡(jiǎn)單快速，且特別適合于大批量樣品的檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體的說(shuō)，涉及一種檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

食品安全衛(wèi)生關(guān)系到人類的生命和健康，引起了國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注。隨著食品生產(chǎn)自然方式的減少，工業(yè)化比重的增加，食品被人們故意或非故意污染的機(jī)會(huì)正逐漸增加，而且隨著國(guó)際貿(mào)易的日益發(fā)達(dá)，食品污染擴(kuò)散的速度之快、范圍之廣、危害之大，也是前所未有的。現(xiàn)在的果蔬保鮮貯藏技術(shù)，主要是依靠適宜的低溫和空氣調(diào)節(jié)，但在果蔬貯藏期間它們能夠承受的溫使用度和氣體條件下，控制不住霉菌的生長(zhǎng)；另外果蔬保鮮貯藏需要的較高濕度，正式霉菌生長(zhǎng)的良好條件，因此在果蔬保鮮中使用防腐劑是必不可少的。防腐劑不但對(duì)果蔬保鮮有利，而且它也可控制產(chǎn)生霉菌，從而使人們免受霉菌毒素的侵害。

防腐劑的使用對(duì)食品貯藏具有重要意義。但在食品中使用化學(xué)品難免讓人們擔(dān)心，防腐劑能殺菌，同時(shí)對(duì)人體也有害處。人們對(duì)于在食品中使用化學(xué)品，尤其是使用防腐劑很擔(dān)心，但在實(shí)際上不使用又不行，防腐劑成了一把雙刃劍。為此，有關(guān)專家提出幾點(diǎn)建議，其中一點(diǎn)要嚴(yán)格執(zhí)行GB2760中規(guī)定的最高使用限量和最高殘留限量，選擇合適的劑量，最大限度地提高藥效，從而減少使用量，將污染降至最低水平。這就需要發(fā)展相應(yīng)的檢測(cè)方法，快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出果蔬中殘留的防腐劑，給消費(fèi)者提供最大限度的博阿胡。防腐劑在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，由于微生物種類的多樣性和防腐劑作用的特點(diǎn)，人們致力加強(qiáng)復(fù)配技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用，采用多種保鮮劑的混合應(yīng)用。因此，需要發(fā)展同時(shí)測(cè)定果蔬中多種保鮮劑的分析方法，提高分析時(shí)間和材料方面效率。

聯(lián)苯在世界各國(guó)廣泛使用，防止水果在生長(zhǎng)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸過(guò)程中腐爛變質(zhì)。但水果中殘留的防腐劑對(duì)人體具有一定的毒性，主要侵害人體的肝腎、神經(jīng)系統(tǒng)和骨髓。有文獻(xiàn)報(bào)道聯(lián)苯有顯著的細(xì)胞毒性。

而時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TR-FIA）由于其特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、廉價(jià)，且特別適于大批量樣品的檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)而越來(lái)越被人們所重視和采用。目前還沒有針對(duì)聯(lián)苯檢測(cè)的時(shí)間熒光免疫分析法的專利和文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種蘋果中聯(lián)苯殘留的檢測(cè)時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種快速簡(jiǎn)便地檢測(cè)蘋果中聯(lián)苯的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒的檢測(cè)方法，用于定量或定性地檢測(cè)蘋果中聯(lián)苯殘留量。

本發(fā)明目的之一是這樣實(shí)現(xiàn)的：檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒，其關(guān)鍵在于由多孔包被板、緩沖液、聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品溶液、抗聯(lián)苯的抗體凍干品、銪標(biāo)記的兔抗鼠抗體、洗滌液和增強(qiáng)液體所組成。

本發(fā)明目的之二是這樣實(shí)現(xiàn)的：檢測(cè)聯(lián)苯的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒的檢測(cè)方法，包括免疫原、包被原和單克隆抗體的制備以及樣品前處理及檢測(cè)，其關(guān)鍵在于：

(1)免疫原的制備：將半抗原聯(lián)苯與牛血清白蛋白（BSA）偶聯(lián)，得到免疫原（聯(lián)苯-BSA）；

(2)包被原的制備：將半抗原聯(lián)苯與卵血清白蛋白（OVA）偶聯(lián)，得到包被原（聯(lián)苯-OVA）；

(3)單克隆抗體的制備：

a.用步驟(1)的免疫原（聯(lián)苯-BSA）免疫小鼠，通過(guò)雜交瘤技術(shù)，得到分泌抗聯(lián)苯的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；