[發明專利]一種檢測蘋果中噻苯咪唑的試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201711073580.7
• 申請日: 2017-11-05
• 公開（公告）號: CN109752551A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 杜霞;洪霞;立雯馨
• 申請（專利權）人: 鎮江華維檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測蘋果中噻苯咪唑的試劑盒由盒體，酶標板一塊，標準液6瓶（1 mL/瓶）：0ppb； 0.6ppb；1.8ppb；5.4ppb；16.2ppb；48.6ppb，酶標物1瓶（6 mL），顯色液A（6 mL），顯色液B（6 mL），終止液（6 mL）濃縮洗滌液10×（40 mL），濃縮樣品稀釋液5×（20 mL），海綿托架所組成；海綿托架內裝有試劑瓶，海綿托架和酶標板均安裝在盒體內。

2.根據權利要求1所述一種檢測噻苯咪唑的試劑盒，其特征在于所述的海綿托架上制有孔和凹槽。

3.根據權利要求1所述一種檢測噻苯咪唑的試劑盒，其特征在于所述的酶標板有塑料支架和各自分開的帶孔穴的塑料條組成。

4.一種檢測噻苯咪唑的試劑盒及用該試劑盒檢測噻苯咪唑的方法，其特征在于抗體的特異性，本方法抗體制備選擇了與噻苯咪唑和牛血清白蛋白進行交叉反應；本方法在對抗噻苯咪唑雜交瘤細胞株大量篩選的基礎上，得到了1株能分泌抗噻苯咪唑的雜交瘤細胞株；本研究成功地篩選出能夠分泌抗噻苯咪唑的單克隆抗體雜交瘤細胞株，制備出對噻苯咪唑具有高親合力、高特異性的單克隆抗體，并建立了快速、靈敏的檢測蘋果中噻苯咪唑污染水平的酶聯免疫吸附試驗檢測方法，為蘋果的快速篩檢提供了技術支持。

5.一種檢測噻苯咪唑的試劑盒及用該試劑盒檢測噻苯咪唑的方法，配液1：樣品稀釋液；用去離子水將噻苯咪唑濃縮樣品稀釋液按1：4體積比進行稀釋，即1份噻苯咪唑濃縮樣品稀釋液加4份去離子水；用于提取樣本的稀釋，樣品稀釋液在4℃環境可保存一個月；配液2：洗滌工作液；用去離子水將濃縮洗滌液（10×）按1：9體積比進行稀釋，即1份濃縮洗滌液（10×）加9份去離子水；用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環境可保存一個月。

6.一種檢測噻苯咪唑的試劑盒及用該試劑盒檢測噻苯咪唑的方法其特征在于進行樣品前處理：蘋果：1、取1g均質樣本于50 mL離心管中，加入5 mL水，劇烈振蕩1 min；2、加入5mL乙腈，劇烈振蕩3 min，4000g以上離心5 min；3、取1ml上清液于10ml玻璃試管中，50～60℃水浴氮氣流下吹干；4、加入1ml正已烷用渦旋儀渦動30s，再加入1mL樣品稀釋液，渦動30s， 4000 r/min離心5 min；5、除去上層有機相，將下層液體轉移到另一潔凈離心管中，用于檢測。

7.一種檢測噻苯咪唑的試劑盒及用該試劑盒檢測噻苯咪唑的方法，其特征在于在酶標板微孔條上預包被噻苯咪唑抗原，洗版，然后用封閉液進行封閉，拍干；加標準品/樣本50 μL到對應的微孔中，加入酶標物50 μL/孔，再加入抗體工作液50 μL/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光反應30 min；小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，加洗滌液 300μL /孔，每次浸泡15~30 s，充分洗滌4~5次，用吸水紙拍干；加入顯色液A 50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，再加入顯色液B 50 μL /孔，用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應15~20 min；每孔各加50 μL終止液，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀在450 nm處，測定OD值（建議用450/630 nm雙波長檢測，在5 min內讀完數據）。