[發明專利]一種絞股藍皂苷TN?1的制備方法

在審

• 申請號: 201711072955.8
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107904277A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 鄭志忠;明艷林;陳良華;黃雯;鄭國華
• 申請（專利權）人: 廈門華僑亞熱帶植物引種園
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司35232
• 代理人: 賴慶梧

技術領域

本發明涉及絞股藍的技術領域，尤其涉及一種絞股藍皂苷TN-1的制備方法。

背景技術

絞股藍(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino.)，又名七葉膽、五葉參、七葉參和甘蔓茶等，是一種葫蘆科絞股藍屬的多年生攀緣植物，系我國民間常用的一種中草藥，是現在所知僅有的含有人參皂苷類成分的非人參屬植物。據統計，目前全世界上的絞股藍品種共有17個種2個變種，其中中國有14個種2個變種，主要分布區域為東南亞等地以及我國秦嶺及長江以南地區。2002年3月5日，絞股藍被國家衛生部列入保健品名單，成為藥食兩用新資源。

絞股藍皂苷(Gypenoside，Gyp)是絞股藍中的一種主要活性成分，其中，Gyp XLVI是福建省南靖地區絞股藍地上部分的主要的絞股藍皂苷之一，而另一絞股藍皂苷，Gyp TN-1的含量則非常低。目前尚未見到有文獻對Gyp TN-1的制備方法和生物活性進行詳細的報道，僅發現Gyp TN-1可以從絞股藍中直接提取獲得，但是得率非常低。參見文獻《Dammarane-type saponins from Gynostemma pentaphyllum[J].Phytochemistry,2011,72(11-12):1453-1459》；Kim等研究人員從1.085kg的絞股藍地上部分中，通過甲醇室溫浸提3周提取后，采用ODS硅膠柱層析或MCI柱層析，最終獲得18mg的Gyp TN-1，得率僅有0.00166％，因此Gyp TN-1難以從絞股藍中直接大量提取。

有鑒于此，本發明人研究和設計了一種絞股藍皂苷TN-1的制備方法，本案由此產生。

發明內容

本發明的目的在于提供一種絞股藍皂苷TN-1的制備方法。

為了實現上述目的，本發明解決其技術問題所采取的技術方案是：

一種絞股藍皂苷TN-1的制備方法，包括以下制備方法：

步驟一、絞股藍總皂苷的提取：將絞股藍地上部分烘干，粉碎，加入乙醇浸提，浸提液減壓濃縮至浸膏狀得到絞股藍提取物，將絞股藍提取物用蒸餾水分散懸浮，石油醚萃取脫脂脫色后再用正丁醇萃取至正丁醇層無色，合并正丁醇層減壓濃縮，干燥，制得絞股藍總皂苷；

步驟二、絞股藍皂苷XLVI的分離純化：將所述絞股藍總皂苷用中壓液相反相柱層析，以丙酮-水梯度洗脫，收集洗脫組分，再用凝膠柱層析，以甲醇作為洗脫劑，收集洗脫組分，減壓濃縮，制得絞股藍皂苷XLVI；

步驟三、酶法轉化絞股藍皂苷XLVI：以柚皮苷酶作為轉化酶，酶法轉化條件為：pH值為4-6，溫度為40-60℃，反應時間12-60h；用乙醇終止反應，減壓濃縮、蒸干，制得絞股藍皂苷XLVI酶法轉化產物；

步驟四、制備絞股藍皂苷TN-1：將所述絞股藍皂苷XLVI酶法轉化產物，用適量甲醇充分溶解，經過凝膠柱層析，以甲醇作為洗脫劑，收集洗脫組分，減壓濃縮，制得絞股藍皂苷TN-1。

作為實施例的優選方式，所述步驟一中，所述絞股藍總皂苷的提取的具體方法為：將絞股藍地上部分進行50℃烘干，粉碎，加入體積分數為80％的乙醇浸提3次，料液比為1:4(g/mL)，每次浸提4h，浸提液在40℃下采用旋轉蒸發儀濃縮至浸膏狀得到絞股藍提取物，將絞股藍提取物用蒸餾水分散懸浮，再用等體積的石油醚萃取3次，棄石油醚層，水層再用正丁醇萃取3次，棄去下層，合并正丁醇層減壓濃縮，45℃下旋轉蒸發儀濃縮，冷凍干燥機干燥，制得絞股藍總皂苷，4℃保存備用；