[發明專利]一種胎盤生長因子的磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201711068721.6
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107543927A
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 許殊榮;程月萍;李瑤;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，具體是一種胎盤生長因子的免疫磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法。

背景技術

胎盤生長因子（Placental growth factor，PLGF）的分子結構為糖蛋白同型二聚體分子，其堿基序列與VEGF有高度同源性，53%的蛋白質氨基酸組成與VEGF相同，屬于VEGF家族中的新成員。PLGF目前有4種不同蛋白質亞型：PLGF-1、PLGF-2、PLGF-3和PLGF-4，4種亞型均由人類滋養細胞和臍靜脈內皮細胞所產生。PLGF在胎盤局部通過自分泌和旁分泌形式調節滋養細胞和內皮細胞的功能。在子宮螺旋動脈重塑過程中，合體滋養層細胞分泌胎盤生長因子（PlGF），促進血管生成，改善血流灌注。妊娠早期胎盤循環未完全建立，胎盤處于相對缺氧狀態，此時PIGF水平較低；妊娠10～12周時，絨毛間隙血流建立，胎盤發展至妊娠中期，母體血流增加，氧分壓上升，胎盤管生成主要由分支結構向非分支結構轉變，而PIGF主要調節非分支血管的生成，PIGF合成也逐漸增加；妊娠28～30周時達到高峰之后胎盤逐漸成熟老化，PIGF水平也隨之明顯下降。

許多研究表明子癇前期患者PLGF水平較正常妊娠婦女下降，且子癇前期患者的滋養細胞表達PLGF mRNA降低。Rohra等研究結果表明，子癇前期患者血漿中PLGF水平降低，PLGF的合成能力減弱可使滋養細胞增殖和浸潤能力減退，造成胎盤缺血、缺氧，導致疾病。子癇前期的臨床癥狀與慢性高血壓、腎病, 系統性紅斑狼瘡、血小板異常性出血、糖尿病血管并發癥、妊娠引起的急性脂肪肝等疾病的癥狀相似，通過檢測PLGF水平可以鑒別區分出胎盤源性的子癇前期。

到目前為止，用于檢測人血清中胎盤生長因子殘留的方法主要有：酶聯免疫法（ELISA）、電化學發光法等。但是，酶聯免疫法雖然檢測價格低廉、快速，但靈敏度不夠，只適用于微量物質的檢測和鑒定；電化學發光需要使用三個電極才能進行一個未知的、多個電活性樣品間復雜反應，電極需要更換而且價格昂貴，由于高濃度的TPA所造成的電化學發光使得電化學發光法具有較高的背景信號等。因此，建立一種有效、快速、簡單、靈敏、抗干擾性高的檢測胎盤生長因子的方法具有十分重要的意義。

本發明采用方法為直接化學發光法，采用吖啶酯作為化學發光標記物具有明顯優勢，主要表現在：反應不需要催化劑，只要堿性環境即可進行，反應迅速，可以完全捕捉反應產生的光子，背景發光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩定性好，體系簡單，激發液成本低，吖啶酯易與蛋白質聯結，且聯結后光子產率不減少。本發明建立的磁微粒化學發光法靈敏度高、特異性強、準確快速、檢測時間短、檢測結果具有更高的準確性與重復性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏度更高、反應時間短、操作簡單、抗干擾性高的胎盤生長因子的磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種胎盤生長因子的磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法，本發明所提供的磁微粒化學發光方法檢測胎盤生長因子的試劑盒，采用磁微粒偶聯胎盤生長因子捕獲抗體，吖啶酯標記胎盤生長因子檢測抗體。試劑盒還包括胎盤生長因子校準品、上述吖啶酯作用的化學發光預激發液A、化學發光激發液B以及清洗液。

作為本發明進一步的方案，所述的磁微粒可直接與胎盤生長因子捕獲抗體偶聯，也可將磁微粒與鏈霉親和素偶聯，同時采用生物素標記胎盤生長因子捕獲抗體。

作為本發明進一步的方案，所述磁微粒的表面修飾基團為一種或多種活性功能基團，包括但不限于羧基、氨基、對甲苯磺酰基或鏈霉親和素-生物素。

作為本發明進一步的方案，所述的化學發光標記物為吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯標記的是胎盤生長因子檢測抗體。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯標記胎盤生長因子檢測抗體的緩沖液是pH 8.0-11.0、濃度為0.01-0.20 mol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液。

作為本發明進一步的方案，所述的捕獲抗體與檢測抗體均為單克隆抗體。

作為本發明進一步的方案，所述的校準品是用含有0.5-5.0% BSA的Tris或PBS或HEPES緩沖液為基質，加入胎盤生長因子純品配置而成，校準品形態為液態。