[發明專利]一種檢測感染性陰道炎的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201711064335.X
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107779494B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 凌燕;王珊珊;吳海燕;張麗梅;任美玲;李瑞;桂春爽;李小雙;劉希;劉金玲;董婷婷;王維;萬松平;康培玉;王加義;焦國賓
• 申請（專利權）人: 北京中生金域診斷技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56;C12Q1/52;C12Q1/44;C12Q1/37;C12Q1/34;C12Q1/32;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.一種檢測感染性陰道炎的試劑盒，其特征在于，其包括：

1)干化學反應裝置

所述反應裝置包括檢測以下指標的反應孔：過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、凝固酶、乳酸、乙酰氨基葡萄糖苷酶、β-內酰胺酶、脯氨酸氨肽酶和丙氨酸氨肽酶；

2)樣品稀釋液；

3)至少一種顯色劑；

所述反應裝置的過氧化氫反應孔包被有辣根過氧化物酶、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物和3-(N-乙基-3-甲基苯胺基)-2-羥基丙磺酸鈉鹽；

所述反應裝置的唾液酸苷酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神經氨酸鹽，其對應的顯色劑A為固紫B或固紅TR；

所述反應裝置的白細胞酯酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸鹽；

所述反應裝置的β -葡萄糖醛酸酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β -葡萄糖醛酸鹽；

所述反應裝置的凝固酶反應孔包被有甘氨酰精氨酸-β-萘胺，其對應的顯色劑B為固藍B、固紅B、固藍BB或固藍RR；

所述反應裝置的乳酸反應孔包被有D-乳酸脫氫酶、黃遞酶和谷丙轉氨酶；

所述反應裝置的乙酰氨基葡萄糖苷酶反應孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；?β-D-氨基葡萄糖苷，其對應的顯色劑A為固紫B或固紅TR；

所述反應裝置的β-內酰胺酶反應孔包被有頭孢硝噻吩；

所述反應裝置的脯氨酸氨肽酶反應孔包被有L-脯氨酸-4-甲氧基-β-萘胺鹽酸鹽，其對應的顯色劑B為固藍B、固紅B、固藍BB或固藍RR；

所述反應裝置的丙氨酸氨肽酶反應孔包被有L-丙氨酸-4-甲氧基-β-萘胺，其對應的顯色劑B為固藍B、固紅B、固藍BB或固藍RR；

所述反應裝置的反應基板上設有若干個形狀、大小一致的孔，分別為上述各指標的反應孔，在每個反應孔中裝有相應的反應墊；

所述試劑盒的制備方法包括以下步驟：

（1）反應基板的制備：

反應基板由ABS工程塑料制成，其中由ABS工程塑料制成的基板上有10個直徑為0.4mm的圓孔，分別對應過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、凝固酶、乳酸、乙酰氨基葡萄糖苷酶、β-內酰胺酶、脯氨酸氨肽酶、丙氨酸氨肽酶孔，在每個反應孔中填入相應的反應墊載體，所采用的載體為濾紙、玻璃纖維或層析紙；

（2）過氧化氫反應墊的制備，從孔底部向上依次疊放有酶墊和底物墊：

所述酶墊由酶溶液滴加在載體上制備而成；以0.001g 3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物，用10mL水溶解，然后加入10000U的辣根過氧化物酶制成；

所述底物墊由底物溶液滴加在載體上制備而成；底物溶液以200 mmol/L pH 6.8的BK-檸檬酸緩沖液為溶劑，加入0.140g 3-(N-乙基-3-甲基苯胺基)-2-羥基丙磺酸鈉鹽制成；

（3）唾液酸苷酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成；底物溶液以含2mol/L NaClO的200mmol/L pH5.5的乙酸鹽緩沖液為溶劑，加入0.05g 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神經氨酸鹽制成；

（4）白細胞酯酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成；底物溶液以含2wt%硫酸鈉的300mmol/L pH 8.3的磷酸鹽緩沖液為溶劑，加入0.05g 5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸鹽制成；

（5）β -葡萄糖醛酸酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成；底物溶液以含50mmol/L乙二醇的200mmol/L pH7.0的磷酸鹽緩沖液為溶劑，加入0.05g 5-溴-4-氯-3-吲哚-β -葡萄糖醛酸鹽制成；

（6）凝固酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成；底物溶液以200 mmol/L pH 8.5的Tris-HCl緩沖液為溶劑，加入0.05g甘氨酰精氨酸-β-萘胺制成；

（7）乳酸反應墊的制備，從孔底部向上依次疊放有底物墊和酶墊：

所述底物墊由底物溶液滴加在載體上制備而成，底物溶液由500μL二甲基亞砜溶解0.01g氯化硝基四氮唑蘭，加入2mL飽和β-環糊精溶液后，再加入2.5mL乳酸顯色劑保護液和0.065g煙酰胺腺嘌呤二核苷酸制成；

所述酶墊由酶溶液滴加在載體上制備而成，酶溶液以5mL酶保護液為溶劑，加入5KU D-乳酸脫氫酶，攪拌至完全溶解，再加入76.9mg黃遞酶和35mg谷丙轉氨酶制成；

上述底物溶液的乳酸顯色劑保護液pH 6.5 0.8mol/L Tris-HCl緩沖液加入16g葡聚糖T70及12g肌醇制得；

上述酶保護液由pH7.5 600 mmol/L雙甘肽緩沖液，加入2g蔗糖、2g D-海藻糖、1g牛血清白蛋白、3g肌醇和250μL吐溫-20制得；

（8）乙酰氨基葡萄糖苷酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成，底物溶液以pH 5.0 500mmol/L檸檬酸磷酸氫二鈉緩沖溶液為溶劑，加入0.025g 5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷，同時加入0.025g葡聚糖T70和0.0582 g L-組氨酸制成；

（9）β-內酰胺酶反應墊的制備，從孔底部向上依次疊放有底物墊和緩沖墊：

所述底物墊由底物溶液滴加在載體上制備而成，底物溶液以異丙醇為溶劑，制成10g/mL頭孢硝噻吩、1%甲基纖維素、10%聚乙烯吡咯烷酮、1% L-半胱氨酸和50mmol/L檸檬酸的混合液作為底物溶液；

所述緩沖墊由緩沖溶液滴加在載體上制備而成，緩沖溶液為pH 7.0、200mmol/L磷酸鹽緩沖液；

（10）脯氨酸氨肽酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成，底物溶液以pH 8.0 500mmol/L的Tris-HCl為緩沖液，制成20mg/mL L-脯氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、10% TritonX-100、1%葡聚糖T70和1% D-海藻糖的混合液作為底物溶液；

（11）丙氨酸氨肽酶反應墊的制備：

所述反應墊由底物溶液滴加在載體上制備而成，底物溶液以pH 8.5 500mmol/L的Tris-HCl緩沖液為溶劑，制成3.5g/L L-丙氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、1%葡聚糖T70、1% D-海藻糖和10% TritonX-100的混合液作為底物溶液；

（12）將步驟（2）-（11）制備的反應墊填入相應的反應孔中，用沖壓機壓實，在孔上粘貼鋁箔保護膜，裝入鋁箔袋中，即得反應裝置，于2-8℃保存；

（13）樣品稀釋液的配制：

所述樣品稀釋液含有0.9％NaCL、10mmol/L氯化鎂、2mmol/L氯化鋅、4mmol/L氯化錳和10±2mmol/L MES，pH6.5±0.2；

（14）顯色劑的配制：

以聚氧乙烯月桂醚為溶劑，配制質量百分濃度0.05～0.3％的固紫B、固紅TR、固藍B、固藍BB或固藍RR溶液。