[發明專利]一種青蒿琥酯抗腫瘤的方法

在審

• 申請號: 201711063476.X
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN109745308A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 王香玉
• 申請（專利權）人: 王香玉
• 主分類號: A61K31/357
• 分類號: A61K31/357;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種青蒿琥酯抗腫瘤的方法，青蒿酯鈉處理后，肝癌細胞中p53、p21蛋白表達水平無明顯變化，而bc12蛋白表達水平降低，青蒿酯鈉誘導凋亡的分子機制是p53非依賴性的，即與p53、p21無關，而與凋亡調節基因bcl2下調有關。也可能與下調增殖細胞核抗原（PCNA）和Bcl2的表達、上調Bax表達有關。經青蒿琥酯處理的SMMC7721細胞拓撲異構酶活性增強，H22肝癌荷瘤鼠經青蒿琥酯處理后，瘤組織凋亡細胞明顯增加，青蒿琥酯抗肝癌作用機理與其影響拓撲異構酶活性有關。

技術領域

本發明涉及一種青蒿琥酯抗腫瘤的方法，具體地說是以一種青蒿琥酯抗腫瘤的方法。

背景技術

目前公知的青蒿琥酯抗腫瘤細胞株的作用及其機理，認為其機理與青蒿琥酯對腫瘤細胞株有直接殺傷作用或細胞毒作用有關，或與誘導細胞凋亡有關。用四甲基偶氮唑鹽法（MTT）檢測了青蒿素對小鼠艾氏腹水癌細胞的細胞毒活性作用，并測得其半數抑制濃度（IC50）時的細胞毒活性作用平均值與阿霉素對人肝癌HepG2細胞株接近。發現雙氫青蒿素對腫瘤細胞有殺傷作用，但對正常細胞則不受影響。青蒿琥酯對55株腫瘤細胞的體外抑瘤作用。結果顯示青蒿琥酯對白血病，用MTT法檢測青蒿琥酯對人結腸癌細胞HCT8、人紅白血病細胞K562及人乳腺癌MCF7細胞株的殺傷作用，結果發現青蒿琥酯對以上３種細胞株都有殺傷作用。

發明內容

研究對象： 青蒿琥酯的體內抗腫瘤作用及機理研究體內研究，目前主要對肝癌的研究較多，也有對鼻咽癌的研究。肝癌細胞株包括人肝癌細胞株和動物肝癌細胞株，主要涉及H22細胞株、S180腹水瘤細胞株、Hep2、BEL7402等各種現成的肝癌細胞株。為探討其抗腫瘤作用機理，進行了不同劑量的青蒿琥酯抗小鼠Hep2肝癌的實驗研究，結果發現腹腔注射60mg·kg-1青蒿琥酯對小鼠Hep2肝癌有顯著抑制作用，抑瘤率為80.4％；同時，不同給藥方式對青蒿琥酯的抑瘤作用亦有影響，口服30mg·kg-1的青蒿琥酯抑瘤率為77.6％，而腹腔注射的抑瘤率僅為12.2％。但腹腔注射同時口服鐵劑后其抑瘤率卻上升為28.9％，可見鐵與青蒿琥酯有明顯的協同抑瘤作用。實驗中，還發現青蒿琥酯似有提升小鼠免疫水平作用。通過肌肉注射給藥方式來研究青蒿琥酯的影響，結果發現青蒿琥酯對小鼠肝癌、S180實體瘤均有明顯的抑瘤作用，青蒿琥酯高（60mg·kg-1·d-1）、中（30mg·kg-1·d-1）、低（15mg·kg-1·d-1）劑量組對小鼠肝癌的抑瘤率分別為39.79％～54.49％、37.79％～49.96％和40.38％～53.95％，對小鼠S180的抑瘤率分別為48.53％～49.60％、47.78％～57.96％和58.87％～68.57％。在青蒿琥酯對小鼠肝癌H22的抑制作用的研究中發現，青蒿琥酯以300mg·kg-1灌胃時，抑瘤率為40％以上，與陽性對照藥5Fu（5氟尿嘧啶）作用相近，3次實驗結果相似，說明青蒿琥酯抑瘤效果明顯，且青蒿琥酯組小鼠的平均生存天數高于5Fu組；小鼠在腹腔注射5Fu的同時口服青蒿琥酯，5Fu的抑瘤率由32%提高到67%，說明青蒿琥酯與5Fu有明顯的協同抗腫瘤作用。對祼鼠異體移植人肝癌的研究結果表明，青蒿酯鈉對祼鼠異體移植人肝癌的生長有明顯抑制作用，青蒿酯鈉各用藥組瘤重均小于生理鹽水對照組，而給藥組祼鼠體質量增長與對照組基本相同，各用藥組祼鼠未見死亡，在100、180和324mg·kg-1·d-1劑量下，抑瘤率分別為44%、49%和71%，明顯高于阿霉素組1.5mg·kg-1·d-1劑量下的抑瘤率（33%）。經青蒿酯鈉處理的肝癌細胞中p53表達未見明顯升高，表明青蒿酯鈉誘導BEL7402細胞凋亡是通過p53非依賴性途徑。用熒光顯微鏡、透射電鏡和流式細胞儀分析青蒿酯鈉誘導肝癌細胞BEL7402凋亡作用，采用Western blot法檢測p53、p21和bcl2，結果與對照組相比，經青蒿酯鈉處理后，肝癌細胞中p53、p21蛋白表達水平無明顯變化，而bc12蛋白表達水平降低，從而認為青蒿酯鈉誘導凋亡的分子機制是p53非依賴性的，即與p53、p21無關，而與凋亡調節基因bcl2下調有關。認為也可能與下調增殖細胞核抗原（PCNA）和Bcl2的表達、上調Bax表達有關。發現經青蒿琥酯處理的SMMC7721細胞拓撲異構酶活性增強，H22肝癌荷瘤鼠經青蒿琥酯處理后，瘤組織凋亡細胞明顯增加，故認為青蒿琥酯抗肝癌作用機理與其影響拓撲異構酶活性有關。