[發明專利]以FAPα的CTL表位肽為基礎的肽類疫苗和微基因疫苗的應用

有效

• 申請號: 201711060548.5
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107722118B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 張海紅;孔維;于湘暉;張芳芳;劉晨露;徐平;耿飛;謝雨;郭倩倩;陸臻楨
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;A61K38/17;A61K39/00;A61K39/39;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

本發明涉及一種以FAPα的CTL表位肽為基礎的肽類疫苗和微基因疫苗的應用，屬于以成纖維細胞激活蛋白α為靶點的腫瘤肽類疫苗和DNA疫苗領域。FAPα來源的抗腫瘤表位肽FAP.291及其模擬肽FAP.291I9和它們所構建的微基因DNA疫苗在制備腫瘤治療性疫苗中的應用。本發明通過篩選鑒定確定了表位FAP.291和模擬表位FAP.291I9可以有效激活BALB/c小鼠特異性的CTL反應。本發明還涉及使用FAP.291和FAP.291I9小肽同佐劑聯用方式及構建它們的微基因形式的疫苗在抗腫瘤中的應用。

技術領域

本發明涉及腫瘤CTL表位肽疫苗和微基因疫苗領域，尤其是涉及FAPα來源的抗腫瘤CTL表位肽，本發明還涉及該表位以肽類疫苗及微基因疫苗形式在制備抗腫瘤疫苗中的應用。

背景技術

成纖維細胞激活蛋白α(FAPα)是腫瘤微環境中腫瘤相關成纖維細胞(CAFs)表面的特異性標志物，FAPα在90％的人類上皮細胞癌組織的CAFs中均有表達。FAPα同腫瘤的生長，侵襲和轉移有著密切的關系：1)FAPα通過酶解作用，解離激活同基質蛋白結合的生長因子，利于腫瘤的增殖和血管生成，促進腫瘤的生長；2)通過膠原酶活性，降解細胞外基質，提供血管生成進入的空間，協助構建腫瘤細胞微血管營養網絡；3)水解腫瘤細胞外基質以及基質中的底物，有利于腫瘤脫離原發灶，促進了腫瘤侵襲和轉移。大量國外文獻研究表明，以FAPα為靶點的腫瘤疫苗可以誘導機體產生免疫反應和抗腫瘤效應。但目前疫苗多采用鼠源或者人源的FAPα全長蛋白的形式，還未見表位肽類形式的疫苗的相關報道。

表位肽具有安全，穩定，可更加高效地誘導特異性免疫反應等優勢。表位肽的鑒定篩選是表位肽疫苗研究的首要內容，表位肽HLA親和性計算機模擬預測可以大大提高篩選效率，節約成本。人HLA-A*2402亞型在亞洲具有超過半數人群的廣泛分布，常常被選為表位肽疫苗的限制性分子類型。有報道指出小鼠的主要組織相容性復合體H2-Kd分子同人HLA-A*2402分子具有相似的表位肽錨定結合基序，即他們對相同的表位肽具有相似的親和力，而親和力是決定表位肽免疫原性的主要因素，研究發現某些應用在表達有H2-Kd MHC亞型的小鼠中具有抑瘤作用的人鼠同源性很高的表位肽，同樣能夠刺激誘導HLA-A*2402陽性個體外周血特異性CTL的產生。此外，報道顯示FAPα具有很高的人鼠同源性，這就提示我們表達H2-Kd的BALB/c小鼠十分合適用做HLA-A*2402限制性表位肽疫苗的初步鑒定有效性的初期探究模型。

表位肽同MHC分子結合的親和力的強弱取決于錨定位點的氨基酸類型。研究表明TCR只同表位肽中1-2個氨基酸發生作用，導致一個TCR可以識別多個pMHC(肽-MHC分子復合物)，這就決定了活化同一個TCR的表位肽并不是單一的。有報道指出，可以通過改變第二位或者第九位錨定殘基氨基酸的類型來增強pMHC的穩定性，從而更有效地刺激免疫應答。這種殘基替換只改變了錨定部位，而TCR的識別區域沒有改變，即TCR識別的交叉活性使得這種方法的應用成為可能。通過這種方式改變的CTL表位肽被稱作“不規則肽”或者“模擬肽”，大量國外文獻報道，模擬肽在多種類型的腫瘤中發揮了抗腫瘤作用，包括慢性淋巴細胞白血病，慢性髓性白血病和急性髓性白血病。

表位肽疫苗還可以串聯用作DNA疫苗的形式，也被稱作微基因疫苗，是近年來肽類疫苗設計應用的一個新方向。應用這種形式的表位肽疫苗的優勢有：1)DNA分子設計合成方便，可以加入蛋白佐劑類組分，并且可進行多表位，多靶點，多HLA限制性類型的疫苗設計；2)DNA疫苗由于包含大量未甲基化的GC序列，免疫后自身可以作為佐劑刺激先天性免疫反應，活化免疫系統；3)疫苗可以在注射位點的細胞內表達，活化抗原提呈細胞，從而誘導炎癥反應和促進抗原的處理、遞呈；4)微基因疫苗通過體內合成加工的方式表達新蛋白，能夠增加MHCⅠ類分子和共刺激分子的表達，而后以內源蛋白的方式遞呈，可以更高效、更長效的誘導特異性CTL反應。

發明內容

本發明的目在于提供一種具有抗腫瘤活性的FAPα來源的CTL表位肽及模擬肽，并且本發明還構建了它們的微基因DNA疫苗形式。同時該發明還提供了兩種表位作為肽類疫苗和微基因疫苗在抗腫瘤治療中的應用。