[發明專利]利用胸腹水組織提取DNA的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201711057278.2
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN109750028A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 臧德山
• 申請（專利權）人: 杭州瑞普基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種利用胸腹水組織提取DNA的方法及試劑盒。本發明提供了利用胸腹水組織提取DNA的方法，包括如下步驟：胸腹水前處理、細胞裂解、核酸吸附和磁性分離、蛋白去除以及核酸從磁珠上釋放的過程。本發明還提供了依據以上方法制備得到的試劑盒。采用本發明的方法和試劑盒能高效、快速地獲得高質量DNA，可以滿足PCR擴增、定量和定性分析、測序等分子生物學實驗的要求，對診斷胸腹水產生的相關疾病具有應用價值，為胸腹水組織中DNA的制備提供了新的思路。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種利用胸腹水組織提取DNA的方法及試劑盒。

背景技術

胸腹水是局限性水腫的一種，是過多的液體在胸腹腔內積聚。胸腹水的產生機制較復雜，與體內外液體交換失衡及血管內外液體交換失衡有關。多種惡性腫瘤均可出現胸腹水，在腫瘤基礎上出現的胸腹水稱為惡性胸腹水。所以胸腹水也常作為疾病診斷的組織材料來源之一。

胸腹水中成分比較復雜，利用人體的胸腹水組織中提取高質量的DNA，是常規分子生物學研究及臨床相關檢測的前提，現行的DNA提取方法中并沒有一種專門針對利用胸腹水中提取DNA的，且無法大體積批量操作，所以導致提取效率低下，提取出的DNA量、純度均達不到實驗分析的要求。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提供一種適用于胸腹水組織中提取DNA的方法，提高DNA的提取效率和提取純度。

為了克服上述現有技術的不足，本發明提供了一種利用胸腹水組織中提取DNA的方法，本發明提供的方法能夠提高得率和純度，且操作簡單，時間短。

本發明是通過以下技術方案實現的：

根據本發明的一個方面，本發明提供了一種利用胸腹水組織中提取DNA的方法，包括如下步驟：

1)胸腹水前處理：無菌條件下抽取胸腹水組織樣本，加入抗凝劑混勻，離心得到胸腹水沉淀，然后加入緩沖液，混勻；

2)細胞裂解：向步驟1)中的混合溶液中加入蛋白酶和裂解液，混勻后置于進行溫育至細胞組織消化完全；

3)加入結合液，混勻后進行溫育，然后加入異丙醇混勻；

4)磁珠吸附和分離：加入磁珠混勻，孵育，然后將孵育好的溶液置于磁性分離裝置上，進行磁性分離；

5)蛋白去除：將步驟4)中加入去蛋白液，混勻后去除蛋白；

6)核酸從磁珠上釋放：加入洗脫液，混勻后，然后吸取上清，得到胸腹水組織DNA。

按照如上實施例記載的步驟，將抽取的胸腹水組織樣本進行離心處理，可以去除抽取到的胸腹水，獲得胸腹水組織，然后加入蛋白酶和裂解液對組織中的細胞進行裂解，利用磁珠吸附核酸，利用去蛋白液去除蛋白，最后利用洗脫液使得核酸利用磁珠上釋放出來。采用本發明實施例記載的方法，可以有效去除蛋白溶液，而且采用磁珠吸附，核酸的吸附效率高，不會摻雜其他雜質。采用本發明實施例記載的方法，能夠提高得率和純度，且操作簡單，時間短。另外根據本發明的上述實施例的利用胸腹水組織提取DNA的方法，還可以具有如下附加的技術特征：

根據本發明的實施例，所述的胸腹水組織樣本為動物胸腹水樣本。需要說明的是，在本發明中所使用的表達方式中“動物”所指的動物種類不受特別限制。根據本發明的實施例，該動物可以為任何具有胸腹水組織的動物，優選為哺乳動物，更優選為大鼠、小鼠、人，最優選為人。

根據本發明的實施例，步驟1)中的抗凝劑為EDTA抗凝劑。EDTA抗凝劑能夠與血液中鈣離子結合成螯合物，凝血過程被阻斷，使得血液不能發生凝固，對于組織樣本的不利影響很小，提高DNA的提取效率。