[發(fā)明專利]腦組織來(lái)源的circ9:4117768|4118881的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711056971.8
• 申請(qǐng)日: 2017-10-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107586849A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 武明花;許梓豪;李沛瑤;王維;蔣健暉;付海娟;馮劍波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 長(zhǎng)沙市融智專利事務(wù)所43114
• 代理人: 袁靖

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種腦組織來(lái)源的環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)circ9:4117768|4118881的應(yīng)用，即檢測(cè)腦組織中circ9:4117768|4118881表達(dá)量的試劑在制備膠質(zhì)瘤診斷制劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腦膠質(zhì)瘤是成年人最為頻發(fā)的腦腫瘤疾病，占顱內(nèi)腫瘤的40.49％。從確診開(kāi)始，腦膠質(zhì)瘤患者平均生存壽命不超過(guò)五年。為了診治膠質(zhì)瘤這種與遺傳物質(zhì)相關(guān)性極高的惡性疾病，必須在分子生物學(xué)水平，從遺傳信息表達(dá)的方面來(lái)探索其發(fā)病機(jī)理。目前而言膠質(zhì)瘤的診斷和治療方法雖處于不斷改進(jìn)階段，但是膠質(zhì)瘤患者生存率并沒(méi)有明顯提高。膠質(zhì)瘤診斷仍然處于以臨床、病理學(xué)和影像學(xué)信息為基礎(chǔ)的經(jīng)驗(yàn)性階段，而且一經(jīng)診斷，絕大多數(shù)均為中晚期，手術(shù)后的生存率不容樂(lè)觀。因此，尋找膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)志物對(duì)患者進(jìn)行診斷分析，盡早確診病情，并相應(yīng)地選擇合理的后續(xù)治療方案，提高生存率，是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域亟待解決的研究任務(wù)。

circRNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中、具有調(diào)控基因表達(dá)作用的內(nèi)源性非編碼RNA分子，具有共價(jià)閉合的環(huán)形結(jié)構(gòu)，廣泛存在于各種細(xì)胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點(diǎn)。近年來(lái)，隨著深度測(cè)序技術(shù)的廣泛應(yīng)用和生物物理和信息學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)人類許多外顯子的轉(zhuǎn)錄本可被非線性地反向剪接或通過(guò)基因重排而形成circRNA，且它們?cè)谒屑艚愚D(zhuǎn)錄本中占了相當(dāng)大的比例，并具有豐富性、穩(wěn)定性、高保守性和時(shí)空特異性等特征，有作為諸多疾病分子標(biāo)志物的潛力。

如今的膠質(zhì)瘤分子分型已經(jīng)越來(lái)越細(xì)化，根據(jù)2016年WHO膠質(zhì)瘤分子分型，今后的分級(jí)方向?qū)⒏鼉A向于精準(zhǔn)醫(yī)療，而circRNA也許今后能作為針對(duì)膠質(zhì)瘤分子分型的新型標(biāo)志物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供檢測(cè)腦組織中circ9:4117768|4118881表達(dá)量的試劑在制備膠質(zhì)瘤診斷制劑中的應(yīng)用，該circRNA circ9:4117768|4118881的序列如SEQ NO:1所示。

所述的檢測(cè)腦組織中circ9:4117768|4118881表達(dá)量的試劑為實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑。

所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑包括進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR的特異性引物，序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑為試劑盒，

該試劑盒包括：(1)從膠質(zhì)瘤組織中抽提總RNA所用試劑，包括RNA穩(wěn)定溶液、Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、無(wú)酶水；(2)以總RNA為模板將circRNA circ9:4117768|4118881逆轉(zhuǎn)錄為cDNA所用試劑，包括逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶以及circRNA circ9:4117768|4118881所用隨機(jī)引物；(3)將cDNA實(shí)時(shí)定量PCR所用試劑，包括circRNA circ9:4117768|4118881實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性引物、GAPDH內(nèi)參特異性PCR引物、實(shí)時(shí)熒光定量SYBR染料、無(wú)酶水；

circRNA circ9:4117768|4118881實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性引物：

正向引物：5'-ATACAAGCCCTTCAACGC-3，

反向引物：5'-GAGTTAGAGACACTATTGCTGGAC-3'。

GAPDH內(nèi)參特異性PCR引物：

正向引物為5′-ATCATCAGCAATGCCTCCT-3′，

反向引物為5′-CATCACGCCACAGTTTCC-3′。

本發(fā)明的有益效果在于：首次發(fā)現(xiàn)circ9:4117768|4118881這種腦組織中的環(huán)狀RNA，并發(fā)現(xiàn)其對(duì)膠質(zhì)瘤具有較高的診斷價(jià)值；通過(guò)熒光定量PCR對(duì)32例膠質(zhì)瘤組織與12例正常腦組織發(fā)現(xiàn)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，circ9:4117768|4118881在兩者中的表達(dá)差異明顯(P＝0.0003)，此法為膠質(zhì)瘤的診斷分析提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持，可以使得膠質(zhì)瘤的診斷更加方便易行，為臨床醫(yī)生快速準(zhǔn)確掌握患者病情，為提高臨床治療效果奠定基礎(chǔ)，并為發(fā)現(xiàn)具有潛在治療價(jià)值的新型小分子藥物靶標(biāo)提供幫助。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析circ9:4117768|4118881在正常腦組織與膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)差異；

圖2為Roc分析腦組織來(lái)源的circ9:4117768|4118881對(duì)膠質(zhì)瘤診斷的特異性，靈敏性。

具體實(shí)施方式