[發明專利]一種沼液濃縮液中6-芐氨基嘌呤的提取制備方法

有效

• 申請號: 201711056708.9
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107857762B
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 孫憲法;張東明;董泰麗
• 申請（專利權）人: 山東民和生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07D473/34
• 分類號: C07D473/34
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 曹莉

本發明涉及沼液濃縮液成分分離制備領域，具體地說，是一種沼液濃縮液中6?芐氨基嘌呤的提取制備方法。具體包括步驟：用甲醇浸提沼液濃縮液干燥后的固體物質，得到提取物浸膏；將提取物浸膏分散于蒸餾水中制成懸濁液，用石油醚萃取后，得到濾渣；用乙酸乙酯萃取的濾渣，將乙酸乙酯萃取液混合減壓濃縮至干燥固體；將的干燥固體干法上樣于硅膠柱，用石油醚—乙酸乙酯為洗脫劑，按體積比20:1；10:1；5:1進行梯度洗脫，餾分收集，檢測并合并相同斑點的餾分后，分離純化得到6?芐氨基嘌呤。本發明的純化方法操作簡單，從而使得操作成本低，因此具有可觀的經濟實用價值和廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及沼液濃縮液成分分離制備領域，具體地說，是一種沼液濃縮液中6-芐氨基嘌呤的提取制備方法。

背景技術

沼液是產沼氣發酵的副產物，在農業生產中享有“生物肥料”和“生物農藥”之稱，并被廣泛推廣和應用。但隨著我國沼氣工程的迅速發展，沼液也同時得到大量生產，因此沼液的資源化、無害化利用技術的研究具有重要意義，是實現沼液高值化利用的有效途徑。6-芐氨基嘌呤作為植物體內自己生產的廣譜性植物生長調節劑，對沼液作為有機肥對農作物的促進作用有重要作用。然而現有技術對沼液進行檢測時主要通過高校液相測出沼液中某些成分的存在。但對成分具體的含量并不了解。通過本發明的方法將此成分從沼液中分離出來，不僅對6-芐氨基嘌呤的含量有具體的了解，而且為天然產物中成分的分離提供新的方法，補充了天然產物化學中提取分離方法數據庫。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明的內容在于提供一種沼液濃縮液中有效成分(6-芐氨基嘌呤)的制備方法，包括以下步驟：

(1)用甲醇浸提沼液濃縮液干燥后的固體物質，得到提取物浸膏。

優選的，所述步驟(1)的沼液濃縮液干燥的方法為將沼液濃縮液置于旋轉蒸發儀中旋干。

優選的，所述步驟(1)的甲醇浸提沼液濃縮液干燥后的固體物質的方法中，提取時間為1～2h，料液質量/體積比為150-250g/L。

具體可以為取適量沼液濃縮液置于旋轉蒸發儀中旋干，取干燥后的沼液濃縮液烘干物200g，加入1L甲醇，回流提取2h，共提取3次,取上清液離心，合并上清液，減壓濃縮至干并稱重，得甲醇提取物的浸膏。

(2)將步驟(1)中的提取物浸膏分散于蒸餾水中制成懸濁液，用石油醚萃取后，得到濾渣；具體可以為將提取物浸膏分散于1L得蒸餾水中制成懸濁液。用適量的石油醚萃取懸濁3次，留取石油醚萃取后的濾渣。

(3)用乙酸乙酯萃取步驟(2)的濾渣若干次后(可以為3次)，將若干次的乙酸乙酯萃取液混合減壓濃縮至干燥固體；

具體可以為用乙酸乙酯萃取3次，將乙酸乙酯萃取液減壓濃縮。

(4)將步驟(3)的干燥固體干法上樣于硅膠柱，用石油醚—乙酸乙酯為洗脫劑，按體積比20:1；10:1；5:1進行梯度洗脫，設定等體積為一個餾分收集(可可以設定每30mL為一個餾分收集)，檢測并合并相同斑點的餾分后，分離純化得到6-芐氨基嘌呤。嘗試了氯仿—甲醇、石油醚—乙酸乙酯、石油醚—丙酮等洗脫劑系統，和各種比例的梯度洗脫，但最后發現收集的餾分點板效果不好，點比較分散，且顏色比較淺，基本處于看不見的狀態。當嘗試用石油醚—乙酸乙酯為洗脫劑，按體積比20:1；10:1；5:1進行梯度洗脫時，意外的發現點板效果明顯。

其中，所述步驟(4)的干法上樣的方法為將步驟(3)的干燥固體用少量的乙酸乙酯溶解后，與100-200目粗硅膠進行拌樣，至乙酸乙酯揮干后撒入到裝好的硅膠柱中。

其中，所述步驟(4)的硅膠柱由300-400目細硅膠組成。

其中，所述步驟(4)的斑點為采用薄層層析色譜檢測后得到的斑點。