[發明專利]干細胞培養基及其應用

有效

• 申請號: 201711055711.9
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107603949B
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 鄒暢;趙盼;成志強;周文斌;郭吉楠
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/09
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 錢學宇

本發明提供了一種干細胞培養基及其應用，涉及干細胞培養技術領域，本發明提供的干細胞培養基包括作為基礎培養基的高糖型培養基和作為添加劑的干細胞的培養上清，與其他干細胞培養基相比，本發明中提供的干細胞培養基配置簡單，對干細胞的培養擴增效率高。同時，不含有胎牛血清成分，從而徹底杜絕了過敏反應，以及一些動物病毒的污染引入，安全性高。其中，所用到的基礎培養基可通過商業化途徑購買，所用到的添加劑可對絨毛干細胞培養廢棄物進行重復利用，很大程度上降低了腫瘤干細胞培養在基礎研究和臨床應用中的成本，且操作無需特殊設備，簡單可行。

技術領域

本發明涉及干細胞培養技術領域，尤其是涉及一種干細胞培養基及其應用。

背景技術

諸多研究表明干細胞不僅可以自我更新，在條件合適的情況下能分化成其他功能細胞，因此干細胞有望成為治療人類疑難疾病的有效手段。然而，干細胞在正常成體組織中含量甚微，在體外如何快速擴增與培養干細胞培養是研究干細胞的作用機制和探索其在治療人類疾病治療方法的重要技術。

腫瘤干細胞是癌細胞的亞群(在腫瘤或血液腫瘤內發現)，就它們能夠產生特定癌癥中發現的所有細胞類型而言，它們類似于正常的干細胞。這包括諸如自我更新、癌癥的播散或分化成多種類型的癌細胞的特征。這樣的細胞據信能夠在腫瘤中作為獨特的群體持續存在，由于形成新的腫瘤而導致癌癥復發和轉移。

在癌癥治療中的一個關鍵挑戰將是根除腫瘤干細胞。癌癥患者的不良預后和高死亡率據信是由腫瘤干細胞的性質引起的，所述性質包括自我更新、轉移、藥物抗性和抗輻射性。常規的抗癌藥物可以殺死大量腫瘤細胞但最終不能根除腫瘤干細胞。存活的腫瘤干細胞播散并再生出新的腫瘤細胞，這與患者的不良預后和復發密切相關。為了開發用于根除腫瘤干細胞并篩選新的抗癌藥物的有效方法，需要對大量的腫瘤干細胞進行試驗。然而，腫瘤干細胞含量甚微，且不穩定，使得對腫瘤干細胞的研究難度較大。大量研究表明，這些低含量的腫瘤干細胞在體外可以通過適當的方法進行進一步擴增，最常規的一種腫瘤干細胞培養基就是添加有10％胎牛血清的培養基。然而，采用這種培養基培養的腫瘤干細胞，不僅生長比較緩慢，而且多次傳代之后其分化成功能細胞的潛能大大降低。

因此，開發一種能夠支持對腫瘤干細胞的培養擴增效率高的干細胞培養基尤為重要。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種干細胞培養基，以緩解現有技術中存在的對腫瘤干細胞培養效率過低，且多次傳代之后其分化成功能細胞的潛能大大降低的技術問題。

本發明的第二個目的在于提供上述干細胞培養基在干細胞懸浮培養中的應用。

本發明提供了一種干細胞培養基，所述干細胞培養基包括：

基礎培養基和添加劑；

所述基礎培養基為高糖型培養基，所述添加劑為干細胞的培養上清。

進一步地，所述基礎培養基與所述添加劑的體積比為1:1-10:1。

進一步地，所述基礎培養基與所述添加劑的體積比為2:1-8:1。

進一步地，所述基礎培養基與所述添加劑的體積比為5:1。

進一步地，所述高糖型培養基為DMEM高糖培養基。

進一步地，所述干細胞的培養上清為人絨毛干細胞的培養上清。

進一步地，所述人絨毛干細胞為培養至P2-P4代的人絨毛干細胞。

進一步地，所述添加劑包括表皮細胞生長因子10-100ng/mL，成纖維細胞生長因子10-100ng/mL和胰島素10-100ng/mL。

進一步地，所述添加劑包括表皮細胞生長因子60ng/mL，成纖維細胞生長因子60ng/mL和胰島素40ng/mL。