[發(fā)明專利]一種DNA固定納米水凝膠微球及其與核酸適配體復(fù)合物的制備和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711055656.3
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN109745567B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉明哲;吳春福;蔣剛鋒;楊靜玉;王立輝;王楠楠
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽藥科大學(xué)
• 主分類號: A61K47/58
• 分類號: A61K47/58;A61K31/704;A61P35/00;C08F220/06;C08F222/38;C08F230/02;C08J3/075
• 代理公司: 沈陽飛揚(yáng)靈睿知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 21255
• 代理人: 靳玲

1.DNA固定納米水凝膠微球與核酸適配體的復(fù)合物，其特征在于，通過如下方法制備：

a. 取核酸適配體適量用緩沖溶液溶解，在室溫10~30℃下孵育20~90分鐘；

b. 將載藥的納米水凝膠微球，加入到a中的溶液中，10~30℃孵育20~90分鐘，得到核酸適配體介導(dǎo)的具有腫瘤靶向功能的納米制劑；

步驟a中，所述的核酸適配體為：MUC1 S2.2、A10 PMSM、AS1411、Sgc8c或CD40；

步驟b中，所述的納米水凝膠微球通過如下方法制備：

（1）將水溶性聚合單體、丙烯類或甲基丙烯類交聯(lián)劑、自由基聚合的引發(fā)劑、5’末端N-(6-羥基己基)甲基丙烯酰胺單體修飾的單鏈DNA Acrydite-DNA加入到反應(yīng)溶劑中，攪拌完全溶解，在適當(dāng)?shù)臏囟认拢磻?yīng)一段時間即可獲得單鏈DNA共價修飾的納米材料；

（2）反應(yīng)結(jié)束后，高速離心、棄上清，對離心后的下層固體進(jìn)行洗滌及冷凍干燥；

（3）將凍干納米材料加入到一定濃度的藥物溶液中，室溫下攪拌12~48 h，之后將該混合溶液進(jìn)行高速離心，即可得到單鏈載藥的DNA固定納米水凝膠微球；

在合成核酸適配體時在其一端合成一段單鏈DNA作為連接臂，所述核酸適配體的連接臂DNA為與單鏈DNA序列完全互補(bǔ)的序列；

所述的水溶性聚合單體為：甲基丙烯酸、N-2-羥丙基甲基丙烯酰胺、N-異丙基丙烯酰胺、N,N’-雙(甲基丙烯酰)胱氨酸、甲基丙烯酸-2-羥乙酯、聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯、聚(乙二醇)甲醚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸縮水甘油酯；

所述的交聯(lián)劑為：N,N’-雙(甲基丙烯酰)胱氨酸二甲酯、N,N’-雙(丙烯酰)胱氨、聚乙二醇二甲基丙烯酸酯；

所述的自由基聚合引發(fā)劑為：偶氮二異丁晴、偶氮二異庚腈、4,4’-偶氮雙(4-氰基戊酸)過硫酸銨；

所述的Acrydite-DNA結(jié)構(gòu)為：

其中DNA為10～80堿基長的任意序列的單鏈DNA。

2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合物，其特征在于，步驟 a中，所述的核酸適配體用量為0.1~20 OD/mL。

3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合物，其特征在于，步驟a中，所述的核酸適配體用量為0.2~10OD/mL。

4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合物，其特征在于，步驟 (1) 中，所述的水溶性單體的濃度為： 1～200 mg/mL；所述的交聯(lián)劑的濃度為：0.1～40 mg/mL；所述Acrydite-DNA的用量為：0.1~50 OD/mL；所述的自由基聚合的引發(fā)劑濃度為：0.01～2 mg/mL。

5.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合物，其特征在于，步驟 (1) 中，所述的水溶性單體的濃度為： 2～100 mg/mL；所述的交聯(lián)劑的濃度為： 0.5～20 mg/mL；所述Acrydite-DNA的用量為：0.5~30 OD/mL；所述的自由基聚合的引發(fā)劑濃度為：0.05~1 mg/mL。

6.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合物，其特征在于，步驟 (1)中，所述的反應(yīng)溶劑為：去離子水、乙醇、乙腈、甲醇、環(huán)己烷或其混合溶液；反應(yīng)溫度為：25～90℃；反應(yīng)時間為：10~90min；步驟（2）中所述的高速離心的轉(zhuǎn)速為：6000～12000 r/min；所述的對離心后的下層固體進(jìn)行洗滌的洗滌溶液為：去離子水、乙腈、乙醇、丙酮；步驟（3）中，所述的藥物濃度為：0.2~ 10 mg/mL。

7.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合物，其特征在于，步驟 (1)中，反應(yīng)溫度為：50～90℃；反應(yīng)時間為：15~75 min；步驟（2）中所述的高速離心的轉(zhuǎn)速為：7000~10000 r/min；步驟（3）中，所述的藥物濃度為：0.3 ~ 5 mg/mL。

8.權(quán)利要求1所述的DNA固定納米水凝膠微球與核酸適配體的復(fù)合物在制備腫瘤靶向制劑中的應(yīng)用。