[發明專利]鎮痛活性肽DKK突變體及其衍生物的制備與應用

有效

• 申請號: 201711054796.9
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN109748961B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 宋永波;張景海;張馨方
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;A61K38/17;A61P29/00
• 代理公司: 沈陽飛揚靈睿知識產權代理事務所(普通合伙) 21255
• 代理人: 靳玲

本發明涉及生物醫藥技術領域，涉及鎮痛活性肽DKK突變體及其與應用，具體涉及利用基因工程技術獲得鎮痛活性肽DKK突變體及其衍生物、類似物、活性片段的方法和在制備鎮痛藥物域中的應用。所述的鎮痛活性肽DKK突變體序列如SEQ ID No.2?11所示。所述的鎮痛活性肽DKK突變體及其活性片段或類似物可以與藥學上可接受的載體混合制備臨床上可接受的注射劑、口服制劑、透皮吸收制劑、粘膜吸收制劑等用于各類痛癥。本發明所述的鎮痛活性肽DKK突變體具有較好的鎮痛活性，其獲得方法常規、簡單、產量高。

技術領域：

本發明涉及生物醫藥技術領域，涉及鎮痛活性肽DKK突變體及其衍生物的制備與應用，具體地說，本發明涉及鎮痛活性肽DKK十個突變體及其衍生物、類似物、活性片段的結構及其制備方法，以及作為鎮痛藥物在醫藥領域中的應用。

背景技術：

疼痛是人類共有而又有較大個體差異性的一種不愉快的主觀感覺，它在軀體受到威脅時提供警報信號，是生命不可缺少的一種保護機制。人們通過大量的研究獲得了蝎鎮痛活性肽，但是獲得的鎮痛活性肽各有差異，其效果也不完全一致。因此，獲得活性更好的蝎鎮痛活性肽也是本領域技術人員研究的重點和方向。

發明內容：

本發明所解決的技術問題是提供一系列鎮痛活性肽DKK突變體。

本發明還提供了所述鎮痛活性肽突變體的衍生物、類似物或活性片段。

本發明還提供了所述的鎮痛活性肽DKK突變體、其衍生物、類似物或活性片段的獲得方法。

本發明進一步提供了所述的鎮痛活性肽DKK突變體、其衍生物、類似物或活性片段的鎮痛活性。

本發明是通過如下技術方案實現的：

本發明利用生物技術，在鎮痛活性肽DKK的基礎上篩選獲得鎮痛活性肽DKK突變體及其衍生物、類似物或活性片段；鎮痛活性肽DKK突變體的鎮痛生物活性較鎮痛活性肽DKK具有顯著提高。

本發明所述的鎮痛活性肽DKK突變體是在DKK(SEQ ID No.1)的基礎上經過DKK的第6、7、8、13、15、23、24、36、37、38、63、64位中的一個或多個位點突變獲得。

進一步地，所述的突變體是將鎮痛活性肽DKK的第15、23、24、36、37、38位中的一個或多個位點突變為Ala或第13位突變為Arg或第6-8位突變為Arg-Arg-Asp或第63、64位的lys缺失突變。

具體地，本發明所述的突變體是在DKK(SEQ ID No.1)的基礎上經過DKK的S13R，KK6364⊿，GSN678RRD，GSN678RRD和KK6364⊿，W36A，T37A，W38A，L15A，K23A，E24A位氨基酸殘基分別進行突變獲得。其序列分別為SEQ ID No.2-11所示。

本發明還包括鎮痛活性肽DKK突變體的衍生物、類似物或活性片段。

本發明提供多種鎮痛活性肽DKK突變體及其衍生物、類似物或活性片段的制備方法，它包括：利用基因工程技術進行表達或通過化學合成獲得。

所述的基因工程技術方法包括：

⑴將鎮痛活性肽DKK突變體及其衍生物、類似物或活性片段的編碼DNA重組至表達載體；

⑵用步驟⑴的重組表達載體轉化適當的宿主細胞(原核或真核細胞)；

⑶在適合的誘導表達條件下，培養步驟⑵的被轉化的宿主細胞；

⑷收獲并純化所得到的表達產物。

在本發明中，宿主細胞包括原核細胞和真核細胞，常用的原核宿主細胞的例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞、昆蟲細胞和哺乳動物細胞等。