[發明專利]用于快速定量檢測血清中包蟲病抗體檢測卡

在審

• 申請號: 201711054437.3
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107884578A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 吳俊清;章健;吳冠英;王澤洲
• 申請（專利權）人: 杭州微瑞科技有限公司
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559;G01N33/561;C12N15/70;C12N15/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于快速定量檢測血清中包蟲病抗體檢測卡，包括檢測卡外殼和裝配在檢測卡外殼內的試紙條，所述試紙條包括帶壓敏膠的塑料底板，在底板上依次粘貼樣品墊、標記物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述標記物墊由載體基層和標記物組成，標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質控微球形成的一層膜，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上包被包蟲病重組抗原為檢測線，包被兔抗雞lgY抗體為質控線，標記物為標記有包蟲病的重組抗原的熒光檢測微球和標記雞lgY抗體的熒光質控微球。

2.根據權利要求1所述的用于快速定量檢測血清中包蟲病抗體檢測卡，其特征在于：所述包蟲病抗原主要指包蟲病表位表達的重組蛋白是指Eg95、EgA31、Em18和Em14重組蛋白，單組份或多組份重組抗原的組合。

3.根據權利要求1所述的用于快速定量檢測血清中包蟲病抗體檢測卡，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上質控線采用的兔抗雞lgY抗體為兔抗雞lgY的lgG。

4.一種制備權利要求2中所述制備包蟲病的方法，其特征在于：原核表達的采用生物信息學技術對包蟲病不同基因型進行比對分析，設計合成包蟲病（囊形和泡型）特異性Eg95、EgA31、Em18和Em14抗原基因，并將其克隆入原核表達質粒Pet-30a中，構建包蟲病抗原Eg95、EgA31、Em18和Em14抗原基因重組表達質粒pET-30a-(Eg95)、pET-30a-(EgA31) 、pET-30a-(Em18)和pET-30a-(Em14)，然后將其轉化大腸桿菌感受態細胞BL21（DE3）pLysS篩選重組表達菌，重組表達菌經IPTG誘導表達Eg95、EgA31、Em18和Em14重組抗原，抗原經過純化后為檢測抗原。

5.一種制備權利要求2中所述制備包蟲病的方法，其特征在于：采用生物信息學技術原理，應用計算機對包蟲病不同基因型的抗原基因進行比對分析，設計合成Eg95、EgA31、Em18和Em14包蟲病表位抗原基因，并將其克隆入原核表達質粒構建包蟲病表位抗原基因重組表達質粒，然后將其轉化大腸桿菌感受態細胞BL21（DE3）pLysS篩選重組表達菌，重組表達菌經IPTG誘導表達包蟲病表位重組抗原，抗原經過親和層析純化后為另外一種檢測抗原。

6.一種權利要求1或2或3或4所述檢測卡的使用方法，其特征在于： 所述檢測卡為定量層析檢測卡，將含有包蟲病抗體的待測液滴入檢測卡的加樣孔中，層析15分鐘，然后使用層析掃描儀對檢測卡進行掃描，層析掃描儀將掃描所得數據無線傳輸給客戶端，客戶端根據掃描數據計算得出檢測卡上質控線和檢測線的熒光信號強度值，同時客戶端從云平臺獲得被檢測包蟲病抗體標準曲線，客戶端根據標準曲線與質控線和檢測線的熒光信號強度值對照關系計算得出待測液中包蟲病抗體含量。

7.根據權利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述標準曲線是通過如下方式導入云平臺的，首先制備一批檢測卡，并配制對應的包蟲病抗體標準品，用檢測卡層析標準品并用層析掃描儀檢測，層析掃描儀將檢測得到的數據處理傳遞給客戶端，客戶端計算得出標準品對應的檢測線和質控線的熒光信號強度值，并根據此數據進行回歸從而得到包蟲病抗體標準曲線，客戶端將標準曲線傳輸至云平臺儲存。

8.根據權利要求7所述的使用方法，其特征在于：所述客戶端計算得出的標準曲線形成一個文件，并對應生成條形碼，客戶端通過掃描條形碼可以從云平臺提取該標準曲線。