[發明專利]用于快速定量檢測血清中A型口蹄疫病毒抗體的檢測卡

在審

• 申請號: 201711054389.8
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107589269A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 邵軍軍;常惠蕓;吳俊清;章健;李揚帆;吳冠英;趙付榮;王澤洲;張永光
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所;成都微瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于快速定量檢測血清中A型口蹄疫病毒抗體的檢測卡，包括檢測卡外殼和裝配在檢測卡外殼內的試紙條，所述試紙條包括帶壓敏膠的塑料底板，在底板上依次粘貼樣品墊、標記物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述標記物墊由載體基層和標記物組成，標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質控微球形成的一層膜，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上包被A型口蹄疫病毒表位重組抗原為檢測線，包被兔抗雞lgY抗體為質控線，標記物為標記有A型口蹄疫病毒VP1重組抗原的熒光檢測微球和標記雞lgY抗體的熒光質控微球。

2.根據權利要求1所述的用于快速定量檢測血清中A型口蹄疫病毒抗體的檢測卡，其特征在于：所述A型口蹄疫病毒表位重組抗原是A型口蹄疫病毒VP1區表位抗原，其為表達的表位重組抗原蛋白。

3.根據權利要求1所述的用于快速定量檢測血清中A型口蹄疫病毒抗體的檢測卡，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上質控線采用的兔抗雞lgY抗體為兔抗雞lgY的lgG。

4.一種制備權利要求2中所述A型口蹄疫病毒VP1表位重組抗原的方法，其特征在于：采用生物信息學技術對A型口蹄疫病毒不同譜系毒株VP1抗原基因進行比對分析，設計合成A型口蹄疫病毒特異性VP1抗原基因，并將其克隆入原核表達質粒構建A型口蹄疫病毒VP1抗原基因重組表達質粒，然后將其轉化大腸桿菌感受態細胞BL21（DE3）pLysS篩選重組表達菌，重組表達菌經IPTG誘導表達A型口蹄疫病毒VP1重組抗原，抗原經過親和層析純化后為檢測抗原。

5.一種制備權利要求2中所述A型口蹄疫病毒VP1表位重組抗原的方法，其特征在于：采用生物信息學技術原理，應用計算機對A型口蹄疫病毒的表位抗原基因進行比對分析，設計合成A型口蹄疫病毒表位抗原基因，并將其克隆入原核表達質粒構建A型口蹄疫病毒表位抗原基因重組表達質粒，然后將其轉化大腸桿菌感受態細胞BL21（DE3）pLysS篩選重組表達菌，重組表達菌經IPTG誘導表達A型口蹄疫病毒表位重組抗原，抗原經過親和層析純化后為另外一種檢測抗原。

6.一種權利要求1或2或3或4所述檢測卡的使用方法，其特征在于： 所述檢測卡為定量層析檢測卡，將含有待測血清樣品滴入檢測卡的加樣孔中，層析15分鐘，然后使用層析掃描儀對檢測卡進行掃描，層析掃描儀將掃描所得數據無線傳輸給客戶端，客戶端根據掃描數據計算得出檢測卡上質控線和檢測線的熒光信號強度值，同時客戶端從云平臺獲得被檢測A型口蹄疫病毒抗體標準曲線，客戶端根據標準曲線與質控線和檢測線的熒光信號強度值的對照關系計算得出待測液中A型口蹄疫病毒抗體的效價，根據效價判定結果。

7.根據權利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述標準曲線是通過如下方式導入云平臺的，首先制備一批檢測卡，并配制對應的A型口蹄疫病毒抗體標準品，用檢測卡層析標準品并用層析掃描儀檢測，層析掃描儀將檢測得到的數據處理傳遞給客戶端，客戶端計算得出標準品對應的檢測線和質控線的熒光信號強度值，并根據此數據進行回歸從而得到A型口蹄疫病毒抗體標準曲線，客戶端將標準曲線傳輸至云平臺儲存。

8.根據權利要求7所述的使用方法，其特征在于：所述客戶端計算得出的標準曲線形成一個文件，并對應生成條形碼，客戶端通過掃描條形碼可以從云平臺提取該標準曲線。