[發(fā)明專利]犬瘟熱病毒抗體快速定量檢測卡及使用方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711054386.4
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107589268A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳俊清;章健;吳冠英;王澤洲
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州微瑞科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種犬瘟熱病毒抗體快速定量檢測卡，包括檢測卡外殼和裝配在檢測卡外殼內(nèi)的試紙條，所述試紙條包括帶壓敏膠的塑料底板，在底板上依次粘貼樣品墊、標(biāo)記物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述標(biāo)記物墊由載體基層和標(biāo)記物組成，標(biāo)記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上包被犬瘟熱病毒H蛋白抗原為檢測線，包被兔抗雞lgY抗體為質(zhì)控線，標(biāo)記物為標(biāo)記有犬瘟熱病毒H蛋白的重組抗原的熒光檢測微球和標(biāo)記雞lgY抗體的熒光質(zhì)控微球。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的犬瘟熱病毒抗體快速定量檢測卡，其特征在于：所述犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白是犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白H蛋白，其為多表位表達(dá)的重組蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的犬瘟熱病毒抗體快速定量檢測卡，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上質(zhì)控線采用的兔抗雞lgY抗體為兔抗雞lgY的lgG。

4.一種制備權(quán)利要求2中所述犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白H蛋白的方法，其特征在于：采用生物信息學(xué)技術(shù)（Bioinformatics）對犬瘟熱病毒不同譜系毒株的H蛋白基因進(jìn)行比對，確認(rèn)犬瘟熱病毒H蛋白基因序列，設(shè)計(jì)一對引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增出目的H基因，將H基因亞克隆于Ppic9K載體，轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)，PCR和酶切鑒定陽性克隆，SalⅠ線性化重組穿梭質(zhì)粒pPIC9k-H，然后電轉(zhuǎn)GS115感受態(tài)，利用G418 抗性進(jìn)行多拷貝整合子初步篩選，提取基因組并做 PCR鑒定，得到陽性菌株，經(jīng)誘導(dǎo)發(fā)酵后，上清發(fā)酵液提純目標(biāo)H蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測確定制備重組蛋白分子量。

5.一種制備權(quán)利要求2中所述犬瘟熱病毒結(jié)構(gòu)蛋白H蛋白的方法，其特征在于：采用生物信息學(xué)技術(shù)原理，應(yīng)用計(jì)算機(jī)對犬瘟熱病毒的結(jié)構(gòu)蛋白H基因進(jìn)行比對分析，及抗原表位預(yù)測，篩選和設(shè)計(jì)犬瘟熱病毒H蛋白特異性的抗原肽序列，并進(jìn)行人工化學(xué)合成抗原肽。

6.一種權(quán)利要求1或2或3或4所述檢測卡的使用方法，其特征在于： 所述檢測卡為定量層析檢測卡，將含有犬瘟熱病毒抗體的待測液滴入檢測卡的加樣孔中，層析15分鐘，然后使用層析掃描儀對檢測卡進(jìn)行掃描，層析掃描儀將掃描所得數(shù)據(jù)無線傳輸給客戶端，客戶端根據(jù)掃描數(shù)據(jù)計(jì)算得出檢測卡上質(zhì)控線和檢測線的熒光信號強(qiáng)度值，同時(shí)客戶端從云平臺獲得被檢測犬瘟熱病毒抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，客戶端根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線與質(zhì)控線和檢測線的熒光信號強(qiáng)度值的對照關(guān)系計(jì)算得出待測液中犬瘟熱病毒抗體的含量。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過如下方式導(dǎo)入云平臺的，首先制備一批檢測卡，并配制對應(yīng)的犬瘟熱病毒抗體標(biāo)準(zhǔn)品，用檢測卡層析標(biāo)準(zhǔn)品并用層析掃描儀檢測，層析掃描儀將檢測得到的數(shù)據(jù)處理傳遞給客戶端，客戶端計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的檢測線和質(zhì)控線的熒光信號強(qiáng)度值，并根據(jù)此數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸從而得到犬瘟熱病毒抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，客戶端將標(biāo)準(zhǔn)曲線傳輸至云平臺儲存。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用方法，其特征在于：所述客戶端計(jì)算得出的標(biāo)準(zhǔn)曲線形成一個(gè)文件，并對應(yīng)生成條形碼，客戶端通過掃描條形碼可以從云平臺提取該標(biāo)準(zhǔn)曲線。