[發明專利]一種含有阻拒層的金屬螯合親和層析介質

有效

• 申請號: 201711053681.8
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107754768B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 瞿歡歡;朱至放
• 申請（專利權）人: 蘇州博進生物技術有限公司
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/30;B01D15/38;C07K1/22
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本案涉及一種含有阻拒層的金屬螯合親和層析介質，以大孔二氧化硅微球為內核，在微球的孔道內填充有由海藻酸鈉、殼寡糖、氮化硅三種組分構成的混合物，在內核表面鍵合環氧氯丙烷，環氧氯丙烷連接配基，配基絡合金屬離子；同時在內核表面粘附直鏈淀粉形成阻拒層，環氧氯丙烷與直鏈淀粉的質量比為1∶4～5；本發明通過阻拒層實現了對非特異性大分子的阻隔，減少了非特異性吸附，提高了對目標小分子多肽的吸附分離效率。

技術領域

本發明涉及一種層析介質，具體涉及一種含有阻拒層的金屬螯合親和層析介質。

背景技術

近年來，生物技術不斷進步，快速有效的從復雜天然混合物中分離、提純多肽逐漸成為開發新型藥物的關鍵與難點。因此，是否能夠對多肽進行高效穩定的分離純化，成為了多肽研究與應用的前提和基礎。隨著層析技術的迅速發展，固定化金屬螯合親和層析作為高效的分離技術，可以應用于多肽的分離純化。

固定化金屬螯合親和層析是一種基于金屬離子與氨基酸殘基配位作用實現分離的技術，由于具有分離速度快，操作簡單等諸多優點，自提出以來便成為分離純化蛋白的強有力方法，被廣泛應用于蛋白質、核酸、多肽等的分離純化中。然而，實際應用中，當需要從混合體系中分離多肽等目標小分子時，由于存在大分子非特異性吸附的影響，導致目標小分子的吸附位點減少，從而降低對目標小分子的吸附性能。因此需要對親和層析介質進行一定的修飾改性，以便達到阻拒大分子，降低大分子的非特異性吸附，提高目標小分子的吸附。現有技術中通過在親和介質基質表面枝接親水性物質聚乙二醇(PEG)，以形成半滲透保護屏障對大分子雜蛋白進行體積排阻，從而提高對小分子多肽的分離純化效率，但是該方法需要提前將PEG的端羥基轉化為醛基、羧基、鹵素、氨基等活性基團才能枝接其于基質，工藝繁瑣，而且在含有大分子雜蛋白的體系中對目標小分子多肽的特異性分離效果不甚理想。

發明內容

針對現有技術的不足之處，本發明的目的在于提供一種含有阻拒層的金屬螯合親和層析介質。

本發明的技術方案概述如下：

以大孔二氧化硅微球為內核，在大孔二氧化硅微球的孔道內填充有由海藻酸鈉、殼寡糖、氮化硅三種組分構成的混合物，在內核表面鍵合環氧氯丙烷，環氧氯丙烷連接配基，配基絡合金屬離子，同時內核表面粘附有直鏈淀粉形成阻拒層，其中，所述環氧氯丙烷與直鏈淀粉的質量比為1∶4～5。

優選的是，所述混合物中海藻酸鈉、殼寡糖、氮化硅的質量分數分別為：

海藻酸鈉 50～55wt％；

殼寡糖 40～45wt％；

氮化硅 3～5wt％。

優選的是，所述大孔二氧化硅與復合物的質量比為1∶4～5。

優選的是，所述直鏈淀粉的聚合度為900～1000。

優選的是，所述大孔二氧化硅微球的粒徑在50～100μm，孔道內徑大于50nm。

優選的是，所述配基為亞氨基二乙酸、三羥甲基乙二胺、次氨基三乙酸中的一種。

優選的是，所述金屬離子為Ni²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Co²⁺中的一種。

本發明的有益效果是：本案選用孔徑大于50nm的大孔二氧化硅微球作為內核，具有較大的內表面積和孔隙比，可以較多吸附填充海藻酸鈉等混合物；海藻酸鈉對二氧化硅具有很好的粘結吸附作用，可以增加混合物對二氧化硅的粘結強度，使內核結構緊密堅實；殼寡糖富含氨基、羥基等活性基團，為鍵合直鏈淀粉或者環氧氯丙烷提供連接基團；氮化硅硬度大，能夠有效增強親和層析介質的機械性能和耐壓性能。