[發明專利]一種提高明月草側芽成活率的方法

在審

• 申請號: 201711051638.8
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107853174A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發明（設計）人: 尹偉;韓麗娟;陳婷;馬秋麗;李真真;曹殿潔;張國升
• 申請（專利權）人: 安徽新華學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A61K36/232;A61P11/00;A61P29/00;A61P11/14;A61P31/04;A61P27/02;A61P19/02;A61P15/00;A61P7/04;A61P19/08;A61P15/14;A61P17/02
• 代理公司: 合肥維可專利代理事務所(普通合伙)34135
• 代理人: 吳明華

1.一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟：

側芽培養：取幼嫩明月草幼嫩莖段流水沖洗并采用無菌處理后去除莖段水分，將每一個帶側芽的莖段切成0.8-1.5cm長，將切后的莖段放入MS培養基進行培養，保持培養基的PH值為5.5-6.5的范圍內，將切后的莖段在培養基中先進行1-3天的暗培養，在此期間每天向培養基加入瓊脂、蔗糖、維生素C，并保持培養基中的瓊脂、蔗糖、維生素C的濃度分別在：4.5-6.5g/L、24-32g/L、15-21mg/L之間，溫度為23-26℃，在通過強度為2000lx-3000lx的光照條件下培養22-30d；

增殖培養：將側芽培養完成后的莖段放入培養基中，培養基中肌醇的濃度為86-110mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.05-0.15mg/L，培養時間為5-7d；

栽種：清洗莖段后置于空氣中鍛煉2-3天，移栽至大棚中，用薄膜覆蓋以保濕保溫，保持濕度在70％-80％之間、溫度在23-26攝氏度之間，并進行50％-60％的遮陰，20d后移除薄膜，4-6個月后進行收割。

2.根據權利要求1所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，所述方法還包括：

黃酮提取：將明月草全株自然風干，研碎成粉末，加入溫度為42-70℃的石油醚，分別按照粉末和石油醚質量比為1:2.5-4和1:5-7進行提取，每次提取的時間為1.5-2H，獲得提取粉末；在提取粉末中加入提取溶液，并采用60℃-70℃的水浴回流并過濾，獲得過濾后粉末；對過濾后粉末采用蒸餾水對提取物進行浸泡，分別用0.3mol/L的NaOH和0.3mol/L的HCl處理20-25分鐘，并用蒸餾水清洗至PH為5.5-6.5之間；采用梯度乙醇進行洗脫，并別收集洗脫液進行合并濃縮。

3.根據權利要求2所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，梯度乙醇的濃度分別為：35％乙醇、55％乙醇、75％乙醇、95％乙醇和無水乙醇，分別獲得各個濃度的乙醇洗脫液進行合并濃縮后，采用30％乙醇進行定容。

4.根據權利要求2所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，所述提取溶液分別為60％乙醇、60％甲醇和蒸餾水。

5.根據權利要求1所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，在采用梯度乙醇洗脫之前，加入聚酰胺粉并進行攪拌，并將粉末溶液加入聚酰胺粉的砂芯層析柱中，然后采用梯度乙醇進行洗脫。

6.根據權利要求1所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，所述MS培養基初基本培養基外還包括濃度為0.02-0.03mg/L的萘乙酸、濃度為0.02-0.03mg/L的芐氨基腺嘌呤。

7.根據權利要求1所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，清洗莖段后置于空氣溫度為20-22℃的空氣中鍛煉2-3天，并保持90％的空氣濕度。

8.根據權利要求2所述的一種提高明月草側芽成活率的方法,其特征在于，將合并濃縮后的洗脫液一起放置于循環回流裝置中進行回流提取，60-70℃條件下，回流提取3-4次，每次30-40min。