[發明專利]一種檢測MDS/MPN相關基因群的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711051636.9
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107868823A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 汝昆;藺亞妮;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 天津協和華美醫學診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙)12219
• 代理人: 張勇

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，進一步涉及篩查MDS/MPN相關基因突變的檢測試劑盒及其醫學解讀數據庫，具體涉及一種檢測MDS/MPN相關基因群的檢測試劑盒。

背景技術

骨髓增生異常綜合征/骨髓增殖性腫瘤(MDS/MPN)是一組臨床、實驗室和形態特征上既有骨髓增生異常綜合征(MDS)又有骨髓增殖性腫瘤(MPN)相互重疊或復合的髓系腫瘤。MDS/MPN的臨床、血液學具有MDS和MPN的雙重特點，即一系或多系髓系細胞具有MDS的無效造血和病態造血，外周血出現相應系列血細胞減少，又具有另一系或多系髓系細胞出現MPN的有效增殖，導致外周血相應系列血細胞增多。然而，其病理學本質與單純的骨髓增生異常綜合征(MDS)或骨髓增殖性腫瘤(MPN)均不相同，也并非這兩種疾病的簡單疊加，而是具有特定病理特征和發病原因的一種疾病。世界衛生組織(WHO)髓系腫瘤分類(2016)中骨髓增生異常綜合征/骨髓增殖性腫瘤(MDS/MPN)包括慢性粒-單核細胞白血病(CMML)、不典型慢性髓性白血病(aCML)、幼年型粒-單核細胞白血病(JCMML)、MDS-MPN伴環形鐵幼粒細胞和血小板增多(RARS-T)和不能分類的MDS/MPN(MDS/MPN-U)等疾病類型。

MDS/MPN的發病率約為1/10萬人口，多累積中老年人，中位年齡為72歲，男女之比為2:1，中位生存時間為42.3月。MDS/MPN的病因尚不明確，一般認為遺傳、輻射(放療)、化學物質(如苯、聚乙烯)、某些藥物(如化療藥)及環境污染和其他職業上的暴露(如濃煙、顏料、殺蟲劑等)可能與MDS/MPN的發生有關。

目前檢測MDS/MPN的方法主要涉及細胞心態學、流式細胞學、細胞遺傳學、分子生物學。其中分子生物學的實驗方法主要有巢式PCR、一代測序等。PCR方法不能直觀的得到具體的突變序列，而一代測序的方法受到測序通量的影響，無法一次性檢測多個基因的全部外顯子區域。而二代測序作為一種高通量的檢測方法，可以一次性準確測量多個基因的外顯子序列，使精準治療成為可能。因此，如何經濟有效地篩選出MDS/MPN的相關基因群并提供一種基于該基因群的檢測試劑盒成為現實技術中亟待解決的問題。

發明內容

本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種檢測MDS/MPN相關基因群的檢測試劑盒，以解決現有技術中MDS/MPN的診斷方法較為局限，缺乏從分子生物學角度診斷MDS/MPN的依據的技術問題。

本發明要解決的另一技術問題是現有技術中MDS/MPN的診斷方法準確性較低。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測MDS/MPN相關基因群的檢測試劑盒，該試劑盒檢測如表1所示的38個基因的突變情況：

表1 MDS/MPN基因群列表

作為優選，所述檢測試劑盒包括以上38個基因的引物，所述引物的擴增范圍包括以上38個基因的全部外顯子區域。

作為優選，該試劑盒檢測如表2所示的17個基因的突變情況：

表2 MDS/MPN基因群優選列表

作為優選，所述檢測試劑盒包括以上17個基因的引物，所述引物的擴增范圍包括以上17個基因的全部外顯子區域。

作為優選，所述檢測試劑盒包括以上17個基因的引物，所述引物的擴增范圍包括以上17個基因的外顯子區域的177個熱點突變位點，所述177個熱點突變及其與所述17個基因的對應關系如表3所示：

表3熱點突變列表

本發明所述的17個基因外顯子區域的熱點突變可用于對MDS/MPN做出輔助診斷，本領域MDS/MPN常規的診斷方法有形態學、細胞遺傳學和流式細胞學，本發明所述方法較佳地從分子生物學角度對MDS/MPN做出診斷。

本發明提供一組檢測本發明所述MDS/MPN相關基因外顯子區域的多重PCR引物，所述引物的擴增范圍包括17個與MDS/MPN相關基因的外顯子區域。利用本發明提供的多重PCR引物，結合二代測序技術，能夠檢測本發明所述突變基因群中的全部外顯子區域。

其中所述的二代測序試劑為本領域常規使用的試劑，只要能夠滿足對所得序列進行二代測序的要求即可。所述試劑制備方法為本領域常規制備方法，較佳地為市售可得。