[發明專利]纖維二糖水解酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 201711049170.9
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107779443B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 蔡文生;宗志友;邵學廣
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/14;C12P19/02;C12P19/12;C12R1/19
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

1.一種纖維二糖水解酶突變體，其特征在于，所述纖維二糖水解酶突變體的活性在纖維素降解中提供降解的功能，所述纖維二糖水解酶突變體為如下的蛋白質：

如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第398位的蘇氨酸被取代為其他氨基酸，所述其他氨基酸為賴氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺。

2.一種DNA分子，其特征在于，所述DNA分子編碼如權利要求1所述的纖維二糖水解酶突變體。

3.如權利要求2所述的DNA分子，其特征在于，所述DNA分子的堿基序列如SEQ ID NO：4所示。

4.一種重組載體，其特征在于，其含有權利要求2所述的DNA分子和與所述DNA分子可操作地連接的用于表達的調節序列。

5.宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求2所述的DNA分子或權利要求4所述的重組載體。

6.一種獲得如權利要求1所述的纖維二糖水解酶突變體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、構建包含SEQ ID NO：2所示的堿基序列的重組載體，該重組載體以大腸桿菌為宿主；

步驟二、以步驟一中得到的重組載體為模板，分別利用如SEQ ID NO:13和14所示的引物對、如SEQ ID NO:15和16所示的引物對、如SEQ ID NO:17和18所示的引物對，通過PCR擴增得到包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：12所示的堿基序列的PCR產物；

步驟三、對所述PCR產物均進行去甲基化處理，之后各自分別轉化入大腸桿菌細胞中培養，獲得含有纖維二糖水解突變體基因的重組載體。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟三中，利用甲基化酶DpnI進行酶解對所述PCR產物進行去甲基化處理。

8.纖維二糖水解酶突變體的生產方法，其特征在于，包括如下步驟：將權利要求6獲得的含有所述纖維二糖水解突變體基因的重組載體的宿主細胞在培養基中培養，在所述宿主細胞中生產基于重組載體所含有的纖維二糖水解酶突變體基因編碼的纖維二糖水解酶突變體。

9.權利要求1所述的纖維二糖水解酶突變體于纖維素水解中的應用。