[發明專利]一種Wright-Giemsa染色試劑及其使用方法

在審

• 申請號: 201711049078.2
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN108414327A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 汝昆;田欣;王占龍;藺亞妮
• 申請（專利權）人: 天津協和華美醫學診斷技術有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙) 12219
• 代理人: 張勇

本發明提供了一種Wright?Giemsa染色試劑及其使用方法，該技術方案首先從配制方法角度對染色試劑進行了表征，該配制方法簡單方便，可以較短時間完成，所得染色劑在特定的保存環境下具有較長的有效期。在此基礎上，本發明圍繞其對生物檢材涂片的染色方法進行了全新設計，該方法先有0.25mL的染色劑對涂片染色30s，而后再滴加1mL磷酸緩沖液繼續保持20min，最后經清水洗凈后晾干即完成染色。本發明染色劑配制簡單、染色時間短、效果優良、各類細胞容易鑒別，主要適用于骨髓液細胞、外周血細胞、胸腹水細胞及腦脊液細胞等標本涂片的染色檢查。

技術領域

本發明涉及生物學試劑技術領域，進一步涉及生物材料染色劑的配制與應用，具體涉及一種Wright-Giemsa染色試劑及其使用方法。

背景技術

由于當下市售試劑染色效果欠佳，從而可能導致對細胞分類或判讀出現失誤，因此對其配方及染色時間做出相應調整。Wright染料由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍組成，對細胞質成分及中性顆粒等染色效果良好，但Wright染料對細胞核染色不如Giemsa染料。Giemsa染料由天青和伊紅組成，對細胞核染色效果良好。甲醇的作用一方面可以使伊紅解離為離子狀態的E-，使亞甲藍解離為離子狀態的M+；另一方面可以起到固定細胞的作用。Wright-Giemsa染液對細胞染色既有物理吸附又有化學親和作用，細胞內多種成分屬于蛋白質類及核酸類物質，均為兩性電解質，所帶電荷隨著溶液的PH值而定，磷酸鹽緩沖液用來調節細胞著色所必須的PH值，只有在最合適的PH條件下才能染出最為理想的觀察效果。

發明內容

本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種Wright-Giemsa染色試劑及其使用方法，以解決現有技術中用于髓液細胞、外周血細胞、胸腹水細胞、腦脊液細胞等標本涂片的染色劑染色效果不佳的技術問題。

本發明要解決的另一技術問題是現有技術中相關染色劑在使用時所需的染色時間較長。

本發明要解決的再一技術問題是現有技術中相關染色劑的配制方法繁瑣。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

一種Wright-Giemsa染色試劑，該染色試劑是通過以下方法制備的：

1)以重量比為5:1的比例將Wright染料和Giemsa染料混合，以Wright染料與甲醇用量比為1:500(g:mL)的比例取甲醇待用；

2)在研缽內將Wright染料和Giemsa染料的混合物研磨至粉狀；

3)取甲醇總體積的1/10加入至粉狀物中繼續研磨20min，將已溶解的染液倒入棕色試劑瓶內，得到未溶解的固形物；

4)重復步驟3)直至固形物全部溶解，將余量的甲醇全部加入至棕色試劑瓶內；

5)室溫條件下密封避光保存1個月。

作為優選，所述Wright-Giemsa染色試劑的有效期為5年。

一種上述Wright-Giemsa染色試劑的使用方法，包括以下步驟：向生物檢材的涂片上滴加0.25mL所述Wright-Giemsa染液，30s后滴加磷酸鹽緩沖液工作液1mL，吹動混勻，20min后用流動水沖洗涂片，晾干。

作為優選，所述生物檢材是骨髓液細胞、外周血細胞、胸腹水細胞或腦脊液細胞。

作為優選，該染色方法中，涂片是位于染片架上完成的。

作為優選，所述吹動混勻是用洗耳球完成的。