[發(fā)明專利]用于同時(shí)檢測藍(lán)莓四種病害病原菌的核酸、試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711048325.7
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107557446B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李偉;張翠萍
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645;C12R1/01
• 代理公司: 北京易捷勝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11613
• 代理人: 齊勝杰

1.一組用于多重PCR同時(shí)檢測導(dǎo)致藍(lán)莓枝枯病、潰瘍病、葉斑病和根癌病四種病原菌的核酸，其特征在于，其包括檢測枝枯病病原菌的上、下游引物，檢測潰瘍病病原菌的上、下游引物，檢測葉斑病病原菌的上、下游引物和檢測根癌病病原菌的上、下游引物；

其中，所述枝枯病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQIDNo.2所示；

所述潰瘍病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.4所示，下游引物序列如SEQ ID No.5所示；

所述葉斑病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.7所示，下游引物序列如SEQ ID No.8所示；

所述根癌病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.10所示，下游引物序列如SEQIDNo.11所示。

2.一組用于熒光定量PCR同時(shí)檢測導(dǎo)致藍(lán)莓枝枯病、潰瘍病、葉斑病和根癌病四種病原菌的核酸，其特征在于，其包括枝枯病病原菌的上、下游引物和探針、潰瘍病病原菌的上、下游引物和探針、葉斑病病原菌的上、下游引物和探針、及根癌病病原菌的上、下游引物和探針；

所述枝枯病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示，探針序列如SEQ ID No.3所示；

所述潰瘍病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.4所示，下游引物序列如SEQ ID No.5所示，探針序列如SEQ ID No.6所示；

所述葉斑病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.7所示，下游引物序列如SEQ ID No.8所示，探針序列如SEQ ID No.9所示；

所述根癌病病原菌的上游引物序列如SEQ ID No.10所示，下游引物序列如SEQIDNo.11所示，探針序列如SEQ ID No.12所示。

3.如權(quán)利要求1或2所述的核酸，其特征在于，其還包括檢測枝枯病病原菌、潰瘍病病原菌、葉斑病病原菌和根癌病病原菌的陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，其中，

所述檢測枝枯病病原菌的陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，含如SEQ ID No.13所示的序列；

所述檢測潰瘍病病原菌的陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，含如SEQ ID No.14所示的序列；

所述檢測葉斑病病原菌的陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，含如SEQ ID No.15所示的序列；

所述檢測根癌病病原菌的陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，含如SEQ ID No.16所示的序列。

4.一種用于同時(shí)檢測導(dǎo)致藍(lán)莓枝枯病、潰瘍病、葉斑病和根癌病的病原菌的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：如權(quán)利要求2中的檢測枝枯病病原菌、潰瘍病病原菌、葉斑病病原菌、根癌病病原菌的上、下游引物和相應(yīng)的探針，各條探針的5′端和3′端分別對應(yīng)標(biāo)記JOE-TAMRA、Texred-MGB、FAM-BHQ1和CY5-BHQ3。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括2×Premix EX Taq，和/或枝枯病病原菌、潰瘍病病原菌、葉斑病病原菌和根癌病病原菌的陽性擴(kuò)增產(chǎn)物。