[發(fā)明專(zhuān)利]LDLR基因突變體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711044797.5
• 申請(qǐng)日: 2017-10-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107699568B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 凃欣;周穎超;謝強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/12
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/12;C07K14/705;C12Q1/6883;G01N33/68;C12N15/861;A61K38/17;A61P3/06
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專(zhuān)利中心 42201
• 代理人: 許恒恒;李智

1.一種分離的編碼LDLR基因突變體的核酸，其特征在于，該核酸包括下列目標(biāo)片段，所述目標(biāo)片段與SEQ NO：1相比，具有下列的突變：c.C2164T。

2.一種分離的多肽，其特征在于，與SEQ ID NO:2相比，所述分離的多肽具有下列的突變：p.Q722X。

3.一種非診斷和治療目的篩選易感高膽固醇血癥的生物樣品的方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)從待檢測(cè)生物樣品提取核酸樣本；

(2)以步驟(1)中的核酸樣本為模板特異性擴(kuò)增LDLR基因，回收純化擴(kuò)增產(chǎn)物，并確定所述擴(kuò)增產(chǎn)物的核酸序列；

(3)判斷步驟(2)所述核酸序列與SEQ ID NO:1相比，是否具有c.C2164T突變，若有，則步驟(1)中所述的生物樣品即為易感高膽固醇血癥的生物樣品。

4.一種非診斷和治療目的篩選易感高膽固醇血癥的生物樣品的方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)從待檢測(cè)生物樣品提取總蛋白樣本；

(2)確定步驟(1)所述總蛋白樣本中LDLR基因表達(dá)的多肽；

(3)判斷步驟(2)所述多肽與SEQ ID NO:2相比，是否具有下列的突變：p.Q722X，若有，則步驟(1)中的生物樣品即為易感高膽固醇血癥的樣品。

5.一種檢測(cè)高膽固醇血癥的生物樣品的試劑盒，其特征在于，含有適于檢測(cè)LDLR基因突變體的試劑，所述LDLR基因突變體為權(quán)利要求1中所述的核酸。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑為核酸探針或引物。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示。

8.一種構(gòu)建體，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的分離的編碼LDLR突變體的核酸。

9.一種重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞是通過(guò)權(quán)利要求8所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞獲得的。

10.一種用于制備預(yù)防或治療高膽固醇血癥的藥物的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白由權(quán)利要求9所述的重組細(xì)胞表達(dá)。

11.一種用于制備預(yù)防或治療高膽固醇血癥的藥物的重組蛋白，其特征在于，由以下步驟獲得：

(1)構(gòu)建含有權(quán)利要求1所述的分離的編碼LDLR突變體的核酸的重組腺病毒；

(2)將步驟(1)所述的重組腺病毒酶切后獲得兩末端是ITR序列的線性雙鏈DNA，將所述線性雙鏈DNA轉(zhuǎn)染到包裝細(xì)胞中；

(3)所述重組腺病毒在包裝細(xì)胞內(nèi)成熟后,收集包裝細(xì)胞和培養(yǎng)液；反復(fù)凍融包裝細(xì)胞和培養(yǎng)液的混合物，離心收集上清，獲得粗病毒；

(4)將步驟(3)所述的粗病毒重新感染包裝細(xì)胞，當(dāng)包裝細(xì)胞出現(xiàn)病變斑時(shí)，收集包裝細(xì)胞；反復(fù)凍融包裝細(xì)胞，離心收集上清，并將上清轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞或組織，獲得制備預(yù)防或治療高膽固醇血癥的藥物的重組蛋白。