[發(fā)明專利]一種魚類傳染性造血器官壞死病病毒的培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711044773.X
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107937353A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設計）人: 任政華;盧中正;尹順義;伍活鐮;蔣東陽;趙輝
• 申請（專利權）人: 廣州齊志生物工程設備有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N5/073;C12N5/02;C12R1/93
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司44416
• 代理人: 徐翔

1.一種魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.取長成單層的CHSE細胞，經胰酶消化后用細胞培養(yǎng)液中和，振搖分散細胞，調整細胞濃度；按4×10⁸cells/mL的量轉接種到含微載體的生物反應器中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度16-20℃，5％CO₂，pH值在7.0-7.5之間，葡萄糖含量不低于330mg/dL，溶氧為40％-60％，攪拌速度為40-60rpm；

S2.待步驟S1中細胞密度達到2×10⁶cells/mL細胞時，按體積比1：1000的比例接種含IHNV病毒毒種，并加入細胞生長液，每隔5分鐘進行攪拌，16-20℃孵育15-45分鐘，然后設置反應器參數：培養(yǎng)溫度為16-20℃，5％CO₂，維持pH值在7.0-7.5之間，葡萄糖含量不低于450mg/dL，溶氧為40％-60％和攪拌速度30-50rpm，進行持續(xù)培養(yǎng)。

2.根據權利要求1所述魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，所用生物反應器為自動化攪拌生物反應器。

3.根據權利要求1所述魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，所用微載體為球形微載體，使用密度為6g/L。

4.根據權利要求1所述魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，所用胰酶為0.125％胰酶。

5.根據權利要求1所述魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述細胞培養(yǎng)液由85-92％MEM培養(yǎng)液、2-5％葡萄糖、6-10％胎牛血清、1-3mg/L氯化膽堿和0.2-0.6mg/L次黃嘌呤組成。

6.根據權利要求1所述魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，所用毒種中IHNV病毒含量為10⁷TCID₅₀。

7.根據權利要求1所述魚類傳染性造血器官壞死病病毒懸浮培養(yǎng)的方法，其特征在于，細胞生長液由90-95％MEM培養(yǎng)液、2-5％葡萄糖和3-5％新生小牛血清組成。