[發明專利]從平菇中提取多糖的方法

在審

• 申請號: 201711044589.5
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107987180A
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 董珊珊
• 申請（專利權）人: 海鹽縣凌特生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

技術領域

本發明涉及天然活性成分提取領域，特別涉及從平菇中提取多糖的方法。

背景技術

平菇(Pleurotusostreatus)又稱側耳、糙皮側耳、蠔薛、黑牡丹菇，臺灣又稱為秀珍菇，是擔子菌門下傘菌目側耳科的種類，是一種相當常見的食用菇。平菇的主要成分是多糖和蛋白質，其中平菇多糖的研究越來越受到關注。從平菇中分離出的多糖，化學成分是葡聚糖和蛋白聚糖類，結構各異，具有免疫調節、抗氧化、抗炎、抗腫瘤和鎮痛等作用，具有一定的醫藥價值。天然多糖類物質作為一類重要的生物大分子，近些年來，人們對其生物學功能有了許多新的認識和發現，已成為生命科學的研究熱點，多糖在食品和醫藥領域的應用也展示出誘人的前景。且隨著食用菌多糖的研究進展，對平菇多糖的研究也逐漸成為熱點。平菇多糖是指從平菇子實體、菌絲體、菌絲體發酵液中提取的多糖。目前，對平菇多糖的研究主要集中于分離純化、結構分析、功能檢測等方面。據報道顯示，從平菇子實體或菌絲體中提取的多糖化學組成是相似的，葡萄糖是組成這些平菇多糖的主要單糖組份。平菇多糖的提取采用了真菌多糖適用的方法，即水提醇沉法，傳統的有熱水浸提法，在研究過程中，引入了超聲波輔助法、微波輔助法、酶解法以及方法之間的協同聯合使用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提取方法簡單可行，機械化操作成度高，耗時短，平菇多糖的提取率高、純度高，易于工業化規模生產，具有良好的應用價值和市場潛力的從平菇中提取多糖的方法。

本發明針對上述技術中提到的問題，采取的技術方案為：

從平菇中提取多糖的方法，包括超微粉碎、平菇粗多糖提取、除蛋白、分級純化、層析純化，其具體步驟為：

超微粉碎：將平菇洗凈，烘干，粗粉碎，按重量比1000:0.011-0.013向平菇粗粉加入助磨劑，超微粉碎，即得平菇粉，備用，助磨劑為重量比為1:0.33-0.38的甲苯磺丁脲和伏格列波糖混合物，超微粉碎可使平菇加工成微微納米級的微粉，使得部分平菇細胞破壁，進而使多糖被大量的釋放出來，從而使得多糖溶出率增大，而助磨劑的加入可防止大分子的多糖結構在超微粉碎時發生斷裂而產生寡糖，減少了多糖在超微粉碎中的損失，避免超微粉碎對多糖平均分子量的影響，保持多糖的活性不被破壞，且助磨劑可在后續多糖提取及純化步驟中徹底除去，無殘留；

平菇粗多糖提取：按料液比為1:17-22向平菇粉加水，在溫度為70-80℃、功率為100-150W下超聲提取80-100min，然后在4000-6000rpm下離心14-18rnin，將上清液濃縮至原體積的1/4至1/2，加入3-5倍濃縮液體積的無水乙醇進行沉淀多糖，靜置過夜，離心，沉淀冷凍干燥得平菇粗多糖，利用超聲波作用產生空化效應，在組織細胞內形成高壓，高壓的釋放在溶液中形成強大的沖擊波，能夠有效地減小、消除水與平菇之間的阻力，從而加大了傳質效率，同時細胞組織受到沖擊波產生的物理剪切力而變形破裂，釋放出胞內物質，大大加速了提取過程；

除蛋白：按料液比為1:17-22將平菇粗多糖溶于水中，加入酶溶液，在40-50℃下酶解2-4h，在90-100℃下滅酶5-10min，冷卻至室溫，然后在4000-6000rpm下離心8-12min，再將上清液中以體積比1:3-5加入Sevage試劑，混合后劇烈振搖20-30min，靜置分層，分去下層變性蛋白質及交界處有機溶劑，反復2-3次，得到脫蛋白多糖液，乙醇沉淀多糖時，蛋白質、肽類、核酸及其他一些小分子物質等也會跟隨多糖沉淀下來，影響多糖的純度，酶解法能夠將糖液中游離的蛋白質和部分糖蛋白水解，從而大大的降低多糖中的蛋白質含量，但是加酶量不適宜易引入外來的蛋白質，因此在酶解之后，再用試劑處理，能夠有效的脫除多糖液中游離及酶解的蛋白質，并保證多糖的存在，有效的降低了多糖的損失率；

分級純化：采用DEAE-52陰離子交換層析柱，上樣后依次用去離子水洗脫、0.1M、0.3M、0.5M、1.0M NaCl溶液洗脫，控制流速為0.6-0.7mL/min，洗脫部分放入截留分子量為6000-8000的透析袋中流水透析24小時，濃縮即得不同級分的平菇多糖，然后，乙醇沉淀過夜、冷凍干燥，即得平菇多糖，離子交換纖維素的基質主體纖維素是親水鏈狀結構，鏈間經過適當的交聯處理，接有功能基團，能夠分離純化各種相對分子質量不同的多糖，不同的溶劑洗脫得到種不同組分，同時洗脫過程，纖維素吸附了色素等物質，使多糖得到純化；