[發明專利]利用茶葉愈傷組織懸浮培養提取制備花青素的方法

有效

• 申請號: 201711042852.7
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107864858B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 劉碩謙;劉賽;王若嫻;劉麗萍;李志冰;胡丹
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C07D311/62;C09B61/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

1.一種利用茶葉愈傷組織懸浮培養提取制備花青素的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

A、選生長旺盛的茶樹，取新梢上第3片展開葉，滅菌后切成小塊；

B、將切得的小塊葉片轉入愈傷組織培養基中培養，每2周更換一次愈傷組織培養基；其中，愈傷組織培養基的組成為：2.2g/L MS鹽+0.05-0.2mg/L噻苯隆+0.05-0.10mg/L吲哚丁酸+0.10-0.20mg/L赤霉素+20.0g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，培養條件為：21℃，10小時光照、14小時黑暗，光照強度1200lux，相對濕度70-85％；

C、待培養出現紅色愈傷組織并長到體積為0.8-1.2立方厘米時，將其切碎成邊長為0.08-0.12毫米的小方塊，按愈傷組織：懸浮培養基為1：100的體積比，將愈傷組織轉入懸浮培養基中振動培養4周；其中，懸浮培養基的組成為：4.4g/L MS鹽+0.05-0.2mg/L噻苯隆+0.05-0.10mg/L吲哚丁酸+0.10-0.20mg/L赤霉素+25.0g/L蔗糖，培養條件為：29℃，16小時光照、8小時黑暗，光照強度3000lux，相對濕度為70-85％，振動速度100-110rpm；

D、懸浮培養后，轉入誘導培養基中震蕩培養1周；其中，誘導培養基的組成為：1.1g/LMS鹽+0.12mg/L噻苯隆+0.08mg/L吲哚丁酸+15.0g/L蔗糖+0.8-1.2g/L二氫楊梅素；培養條件為：20℃，12小時光照、12小時黑暗，光照強度4000lux，相對濕度70-85％，振動速度90-100rpm；

E、誘導培養后收集懸浮培養細胞，干燥后粉碎至100mu，然后于懸浮培養細胞中加入0.7-1.5％體積濃度的鹽酸乙醇溶液于55-65℃超聲提取2-3次，每次提取條件為：超聲功率200-300w，時間30-50min，每1g懸浮培養細胞加20-50ml鹽酸乙醇溶液；合并提取液，真空濃縮直至溶劑全部揮干，得到花青素產品。

2.如權利要求1所述的利用茶葉愈傷組織懸浮培養提取制備花青素的方法，其特征在于，所述步驟A中的茶樹品種為尖波黃、碧香早或福鼎大白。

3.如權利要求1所述的利用茶葉愈傷組織懸浮培養提取制備花青素的方法，其特征在于，所述步驟A中的滅菌是指將茶葉以1％體積濃度的次氯酸鈉水溶液浸泡18-20min，取出，用滅菌水沖洗干凈后用無菌風吹干，無菌條件下將葉片切成小塊。