[發明專利]增強型的細胞微載體灌流培養的截留方法

有效

• 申請號: 201711042170.6
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107541464B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 莊長鷹
• 申請（專利權）人: 山東亦度生物技術有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/36;C12N5/00
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 鄭向群

本發明提供增強型的細胞微載體灌流培養的截留裝置及方法，其中所述裝置本體內部設有分層漏斗，分層漏斗底部為沉降腔，沉降腔上開有培養基—微載體入口，沉降腔底部連接連接管，連接管下方為培養基—微載體回流口，分層漏斗頂部為培養基出口，裝置本體的一側分層漏斗處開有觀察窗；優點為：本發明具有固液沉降分離、控制液位的功能，提高細胞微載體培養的灌流體積和截留效率，解決進液速度過大時微載體因不易沉降而流失的問題，在微載體截留過程中對細胞損傷較小。

技術領域

本發明涉及細胞微載體灌流培養領域，尤其是涉及增強型的細胞微載體灌流培養的截留方法。

背景技術

采用灌流培養系統代替傳統的批次或批次-補加的生產工藝可以大大提高細胞密度和目的產物的產量，在生物制藥行業中得到越來越多的的應用。為了進行有效的灌流培養，需要對微載體進行截留。微載體的截留方式可分為內部截留和外部截留。內部截留主要有中空纖維過濾、旋轉過濾等技術，外部截留方式有外部過濾、離心和沉降等技術，但在實際應用中這些裝置或截留效率有限，或造價過高，或使用時間不長，并不能滿足各方需求。目前應用較多的是美國NBS微載體沉降系統，小于9g/L的微載體投放密度可獲得每天1-2個工作體積的灌流率。當每天需要的灌流體積較大時，使用一個沉降柱難以達到要求，會造成微載體流失，固液分離效率低，且液面不易控制。

發明內容

本發明的目的在于為解決現有技術的不足，而提供增強型的細胞微載體灌流培養的截留方法。

本發明新的技方案是：增強型的細胞微載體灌流培養的截留裝置及方法，其裝置包括沉降柱本體、沉降腔、分層漏斗、培養基-微載體入口、培養基出口、微載體回流口、觀察窗、沉降柱、生物反應器、蠕動泵，所述裝置本體內部設有分層漏斗，分層漏斗底部為沉降腔，沉降腔上開有培養基—微載體入口，沉降腔底部連接連接管，連接管下方為培養基—微載體回流口，分層漏斗

頂部為培養基出口，裝置本體的一側分層漏斗處開有觀察窗。

所述的培養基-微載體入口、微載體回流口均插入細胞微載體生物反應器的培養基液面下。

所述的培養基出口通過連接管與生物反應器外的蠕動泵相連。

所述的兩個微載體沉降柱聯合使用，且保持一個沉降柱的培養基-微載體入口管高于另一個沉降柱的培養基-微載體入口管。

所述的截留方法為：

1）培養基-微載體入口、微載體回流口均插入細胞微載體生物反應器的培養基液面下；培養基出口通過連接管與生物反應器外的蠕動泵相連；兩個微載體沉降柱聯合使用，且保持一個沉降柱的培養基-微載體入口管高于另一個沉降柱的培養基-微載體入口管，用以更好的控制生物反應器中培養基的液位；

2）液體通過下端的培養基-微載體入口進入沉降腔中，通過細胞微載體的自身重力在分層漏斗中逐級沉降而實現固液分離，細胞微載體通過下端的微載體回流管返回生物反應器，上層的培養液在蠕動泵的作用下通過沉降柱上端的培養基出口排出；

3）通過觀察窗觀察沉降柱中的微載體沉降情況。

所述的兩個沉降柱聯合使用時需要保證總的進液流速小于兩個沉降柱出液速度之和，進液口高的沉降柱的出液速度大于進液口低的沉降柱的出液速度。

本發明的有益效果是：本發明具備固液沉降分離、控制液位的功能，提高了細胞微載體培養的灌流體積和截留效率，解決進液速度過大時微載體因不易沉降而流失的問題，在微載體截留過程中對細胞損傷較小。

附圖說明

圖1為本發明的結構示意圖。

圖2為本發明聯用時的結構連接圖。

其中：1為培養基出口，2為沉降柱本體，3為分層漏斗，4為沉降腔，5為培養基—微載體回流口，6為培養基—微載體入口，7為觀察窗，8為沉降柱，9