[發明專利]一種娃兒藤的組培快繁方法

在審

• 申請號: 201711037126.6
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107711501A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 杜樂貴
• 申請（專利權）人: 融安縣飛煌原生草藥材專業合作社
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司11403
• 代理人: 李生梅

【技術領域】

本發明涉及種子處理技術領域，具體涉及一種娃兒藤的組培快繁方法。

【背景技術】

娃兒藤為蘿摩科(Asclepiadaceac)娃兒藤屬(Tylophora)多年生葡萄性藤狀草本，主要以根及全草入藥，主要分別于我國云南、廣西、廣東、湖南、江西、浙江、臺灣、越南、老撾、緬甸、印度等地,喜溫暖，能耐陰，較耐寒，常生長在海拔900來以下的山地灌叢中，或山谷及向陽疏密雜樹林中。娃兒藤蔓條繚繞，適于籬墻欄桿、門架、花廊配植，也可點綴在假山和巖坡隙縫間，攀繞其上，蔓條下垂，頗為別致。

娃兒藤入藥在我國有悠久的歷史,《江西草藥》記載其具有祛風化痰、通經散癖的功效。《南寧市藥物志》記載其有行氣、散癖、止痛、化痰、止咳、治跌打、刀傷、咳嗽、風濕痛的功效。江西《草藥手冊》記載其能散癖、催吐治哮喘痰咳、咽喉腫痛、跌打損傷、風濕痛、胃痛、腹痛等。現代藥理研究表明，娃兒藤主要生物活性成分是生物堿類化合物，人們已經通過化學合成方法合成包括娃兒藤堿在內的一系列娃兒藤堿衍生物，而且這些娃兒藤堿的衍生物具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗癌等等明顯的藥理活性。

娃兒藤在廣西民間用于鎮癌痛，且有療效佳，由于連年挖掘，野生資源自然授粉率低，傳統生長環境受到破壞，目前娃兒藤藥材價格居高不下，且已處于瀕危狀態。采用組織培養技術系列娃兒藤成為重要的良種繁育途徑之一，目前對娃兒藤的組織培養研究較少，缺少一種能有效將娃兒藤組培苗進行組培培養的技術，嚴重制約了娃兒藤訓養種植的進程。

【發明內容】

本發明的發明目的在于：針對上述背景技術中存在技術問題，本發明提供一種娃兒藤的組培快繁方法，本方法可以顯著提高娃兒藤育苗效率，縮短育苗周期，為娃兒藤快繁育苗的生產提供技術支持，解決目前娃兒藤人工種植率低的問題。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種娃兒藤的組培快繁方法，包括以下步驟：

S1.無菌苗的獲取：選擇娃兒藤莖苗，當莖苗生長至2-4對葉時，先用毛刷粘75-80％酒精清洗莖苗，待30-60min后用滅菌過的剪刀從頂端剪取長2-4cm鮮嫩芽做為外植體，貯藏在2-5℃環境下，備用；

S2.消毒殺菌：取外植體置于超凈工作臺上，先用流水沖洗25-45min，接著用鑷子在75-85％的酒精來回晃動消毒15-25s，再用無菌水沖洗5-9遍，最后用0.7-0.9％次氯酸鈉溶液消毒8-13min，取出外植體用無菌濾紙吸干表面水分，得消毒外植體，備用；

S3.誘導培養：取消毒外植體剪口端切除2-5mm后斜插入誘導培養基上，轉移至濕度為24±0.5℃、光線較暗的室內先培養2-4天，然后移入光照時間4-7h/d、光照強度1200-1600Lx，空氣濕度65-75％的環境下繼續培養7-13天，得到叢生芽，備用；

S4.增殖培養：取S3中叢生芽切取1-2個芽，接種至增殖培養基中進行增殖培養，培養環境為：溫度24±0.5℃，光照時間5-8h/d，光照強度1200-1600Lx、空氣濕度65-75％，培養25-35天，待長出2-4對葉后從基部切下，得到增殖體，備用；

S5.生根培養：取S4中得到的增殖體接種至生根培養基上進行誘導生根，然后置于光照溫度25±0.5℃，黑暗溫度18±0.5℃，光照時間7-9h/d，光照強度1500-1800Lx、空氣濕度55-70％的環境下培養生根，培養至娃兒藤根部生根3-12條時，得生根苗，備用；

S6.煉苗移栽：取步驟S5中得到的生根苗，移至溫度為25-28℃、空氣相對溫度為70-80％、光照強度為2000-2600Lx、通風良好的環境下先開1/4-1/3瓶蓋，適應0.5-1天后打開1/2-2/3瓶蓋，0.5-1.5天后全開瓶蓋，繼續煉苗1-3天；然后取出組培苗洗凈培養基，移栽至苗床中栽種，在苗床中種植一段時間后，可進行移栽種植，得娃兒藤移栽苗。

優化的方案，所述次氯酸鈉溶液中還含有質量百分比濃度為0.05-0.09％的伊曲康唑和0.04-0.08％紅霉素。

進一步優化的方案，S5步驟中培養生根時間為7-25天。

再進一步優化的方案，所述苗床由腐殖土、巖石、海藻肥、草木灰、甘蔗渣按照質量比為3：1：0.5：0.4：1組成。

再進一步優化的方案，苗床所處的環境為移至溫度為25-28℃、空氣相對溫度為70-80％、光照強度為2000-2600Lx。