[發明專利]一種性激素結合球蛋白的磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201711036915.8
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107843734A
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 常燕;胡雪婷;曹晶;劉麗青;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，具體是一種性激素結合球蛋白的免疫磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法。

背景技術

性激素結合球蛋白（sex hormone-binding globulin, SHBG），又稱睪酮-雌二醇結合球蛋白，是由兩個相同的亞單位組成的同型二聚體，為一種大分子球蛋白，主要由肝細胞合成，可通過N末端的晶體結構與性激素發生可逆性結合。人體內SHBG的主要功能是運輸性激素并調節其在骨骼、脂肪、肌肉等靶組織中的生物學效應；男性體內44%～60%的結合型睪酮與SHBG結合，而女性血循環中SHBG主要負責轉運約95%的雌激素，其水平是維持雄激素/雌激素相對平 衡的間接指標，并與胰島素抵抗有明顯關系。因此，SHBG可作為體內睪酮測定的補充，并對內分泌代謝性疾病有重要意義。

性激素結合球蛋白增高可見于男性性功能減退、甲狀腺功能亢進、肝硬化、慢性肝炎、脂肪肝。性激素結合球蛋白降低可見于女性多毛癥及男性化、多囊卵巢綜合征、肥胖、甲狀腺功能減退。

到目前為止，用于檢測性激素結合球蛋白的方法主要有：放射免疫分析法（Radioimmunoassay，RIA）和酶聯免疫吸附測定法（ELISA）。放射免疫分析法是基于抗原與抗體特異性結合的分析方法，其競爭結合原理與ELISA分析相似，雖然放射免疫測定法特異性較高，靈敏度也較高，但其局限性也很顯著，主要有以下幾點：操作步驟較多，試劑價格昂貴，需使用特殊的檢測設備，并且使操作人員易受到放射性危害，同時試劑盒的使用期限也會受標記的放射性物質的衰變期的限制，故近年來許多本來使用RIA測定的藥物多已改用其他免疫分析方法。酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測技術是利用抗原-抗體之間特異性的免疫反應識別生物液體中的靶分子，并利用酶-底物的顯色反應定量的反應待測樣本中靶分子的含量。該方法雖然檢測價格低廉、快速，但靈敏度也不夠，只適用于微量物質的檢測和鑒定。因此，建立一種有效、快速、簡單、靈敏、抗干擾性高的檢測性激素結合球蛋白的方法具有十分重要的意義。

本發明采用方法為直接化學發光法，采用吖啶酯作為化學發光標記物具有明顯優勢，主要表現在：反應不需要催化劑，只要堿性環境即可進行，反應迅速，可以完全捕捉反應產生的光子，背景發光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩定性好，體系簡單，激發液成本低，吖啶酯易與蛋白質聯結，且聯結后光子產率不減少。本發明建立的磁微粒化學發光法靈敏度高、特異性強、準確快速、檢測時間短、檢測結果具有更高的準確性與重復性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏度更高、反應時間短、操作簡單、抗干擾性高的性激素結合球蛋白的磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種性激素結合球蛋白的磁微粒化學發光檢測試劑盒及制備方法，本發明所提供的磁微粒化學發光方法檢測性激素結合球蛋白的試劑盒，采用磁微粒偶聯性激素結合球蛋白捕獲抗體，吖啶酯標記性激素結合球蛋白檢測抗體。試劑盒還包括性激素結合球蛋白校準品、上述吖啶酯作用的化學發光預激發液A、化學發光激發液B以及清洗液。

作為本發明進一步的方案，所述的磁微粒可直接與性激素結合球蛋白捕獲抗體偶聯，也可將磁微粒與鏈霉親和素偶聯，同時采用生物素標記性激素結合球蛋白捕獲抗體。

作為本發明進一步的方案，所述磁微粒的表面修飾基團為一種或多種活性功能基團，包括但不限于羧基、氨基、對甲苯磺酰基或鏈霉親和素-生物素。

作為本發明進一步的方案，所述的化學發光標記物為吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯標記的是性激素結合球蛋白檢測抗體。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯標記性激素結合球蛋白檢測抗體的緩沖液是pH 8.0-11.0、濃度為0.01-0.20 mol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液。

作為本發明進一步的方案，所述的捕獲抗體與檢測抗體均為單克隆抗體。

作為本發明進一步的方案，所述的校準品是用含有0.5-5.0% BSA的Tris或PBS或HEPES緩沖液為基質，加入性激素結合球蛋白純品配置而成，校準品形態為液態。

作為本發明進一步的方案，所述的性激素結合球蛋白校準品溶液濃度分別為：0 nmol/L、0.5 nmol/L、3.0 nmol/L、18.0 nmol/L、108.0 nmol/L、650.0 nmol/L。