[發明專利]一種胎兒纖連蛋白的化學發光檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711035489.6
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107817351A
• 公開（公告）日: 2018-03-20
• 發明（設計）人: 曹晶;劉麗青;胡雪婷;常燕;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/531;G01N21/76
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技術領域

本發明屬于免疫檢測分析領域，具體是一種胎兒纖連蛋白的免疫化學發光檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

胎兒纖連蛋白（fetal fbronectin，fFN）是可用于預測早產短期風險的糖蛋白。fFN由位于羊膜囊和母親子宮內膜（蛻膜）之間接合處的絨毛膜滋養細胞產生。胎兒纖連蛋白在此接合處可大量檢出并維持接合處的完整性。妊娠早期即可在宮頸陰道粘液檢測到fFN，24周以后則檢測不到fFN。但是，在妊娠36周后又可重新檢測到fFN。據美國婦產科學會（ACOG）稱，正常的孕期為40周，婦女可在懷孕36-42周時分娩。孕期36周以后在宮頸陰道粘液中檢測到fFN是正常的，因為fFN通常在準備好分娩時釋放。妊娠早期在陰道粘液中升高的fFN反映了子宮胎接合處組織正常的生長和建立。當這一過程結束，fFN水平逐漸降低。孕期22-36周之間不能檢測到fFN。此期間fFN水平升高反映子宮胎盤接合處失調，且與早產風險增高相關。

妊娠期間母體和胎兒本身合成一些特異性物質，同時誘發早產的某些因素如生殖道感染時，可刺激母體和胎兒合成一些特異性物質如fFN。當早產發生前，母體發生一些相應的變化，其可能的機制是：引起早產發生的炎癥產物和炎癥介質通過刺激絨毛產生fFN，其不受前列腺素的調節，并且不依賴花生四烯酸環氧化酶通路；炎癥反應過程中，白細胞通過釋放前列腺素及蛋白酶在局部發揮作用，破壞蛻膜、絨毛間的細胞外基質界面，加強胎膜的降解，改變宮頸條件，使fFN釋放到宮頸、陰道中，從而使宮頸陰道分泌物中fFN含量有所增加；早產有宮縮出現甚至是難以察覺的子宮收縮時，可使蛻膜、絨毛膜分離，導致胎膜和蛻膜輕微損傷釋放fFN，同時，羊水中的fFN又可經損傷的胎膜滲漏到羊膜腔外，這些fFN也可經胎膜與子宮蛻膜的間隙進入宮頸和陰道。由此可從宮頸陰道分泌物中檢測fFN來預測早產，而且測定宮頸陰道分泌物操作簡單、無創傷，使得此項檢查更多地為人們所關注。近年人們對宮預陰道分泌物中的fFN預測早產已進行了較多的研究，認為其是預測早產的一個重要指標。

目前胎兒纖連蛋白檢測的方法有：膠體金法等。CN 104391121 A（2015年3月）公開了一種膠體金法檢測胎兒纖連蛋白的試劑盒，利用膠體金法進行檢測的缺點是最后檢測結果是以肉眼可見的顏色進行表征，誤差較大，并且操作繁瑣，流程較多，更易出現誤差，靈敏度低。本發明采用吖啶酯標記，具有如下優點：①背景發光低，信噪比高，發光反應干擾因素少；②閃光型發光，光釋放快速集中、發光效率高、發光強度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗體結合位點，提高系統整體靈敏度；④易于與蛋白質聯結且聯結后光子產率不減少；⑤標記物穩定，不受環境氧化劑的影響(在2-8℃下可保存數月之久)。因此吖啶取代物是一類非常有效的化學發光標記物。

本發明采用的方法為化學發光法，其優點為：靈敏度高、特異性強、準確快速、檢測時間短、線性范圍寬，檢測結果具有更高的準確性與重復性。

發明內容

本發明提供了一種具有較高靈敏度和特異性的檢測胎兒纖連蛋白的試劑盒。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種胎兒纖連蛋白的化學發光檢測試劑盒及制備方法，本發明所提供的化學發光法檢測胎兒纖連蛋白的試劑盒，采取磁微粒偶聯胎兒纖連蛋白（fFN）捕獲抗體，吖啶酯標記胎兒纖連蛋白（fFN）檢測抗體。試劑盒還包括胎兒纖連蛋白校準品、化學發光預激發液A、化學發光激發液B以及清洗液。

作為本發明進一步的方案，所述的磁微粒可直接與胎兒纖連蛋白抗體偶聯，也可將磁微粒與鏈霉親和素偶聯，同時采用生物素標記胎兒纖連蛋白抗體。

作為本發明進一步的方案，所述磁珠的表面修飾基團為羧基、氨基、鏈霉親和素-生物素或對甲苯磺酰基。磁珠使用前固相的不完全沉降會影響精確度，因此選擇時應選分散性好，沉降速度慢的磁珠。

作為本發明進一步的方案，所述的化學發光標記物為吖啶酯，如：NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯標記的是胎兒纖連蛋白（fFN）檢測抗體。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯標記胎兒纖連蛋白（fFN）檢測抗體的緩沖液是pH 8.0-11.0、濃度為0.01-0.20mol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液。

作為本發明進一步的方案，所述的吖啶酯與抗體的摩爾比為5-100:1。