[發明專利]人脂肪干細胞特異性培養基

有效

• 申請號: 201711035068.3
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107686827B
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 楊駿;張麗;王強
• 申請（專利權）人: 集鈞（上海）醫療科技發展有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 劉陽

本發明提供一種人脂肪干細胞特異性培養基，由高糖型DMEM基礎培養基、堿性成纖維細胞生長因子、人表皮細胞生長因子、重組人胰島素、左旋卡尼丁、還原型谷胱甘肽、細胞增殖促進肽、亞油酸、α?酮戊二酸組成。該培養基不僅能提供加速的人脂肪干細胞培養時間，同時培養得到人脂肪干細胞均一性較好，并且非常有利于后續的分化。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種人脂肪干細胞特異性培養基。

背景技術

脂肪干細胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、ADSC多能細胞是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞。主要恢復組織細胞的修復功能，促進細胞的再生，恢復年輕面容的同時，身體機能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內而外真正的有效抵抗衰老。

研究發現ADSCs細胞能夠在體外穩定增殖且衰亡率低，同時它具有取材容易、少量組織即可獲取大量干細胞，適宜大規模培養，對機體損傷小等優點，而且其來源廣泛，體內儲備量大，適宜自體移植，逐漸成為近年來新的研究熱點之一。

傳統的脂肪移植手段由于存在免疫排斥、炎癥反應等缺陷難以得到讓人滿意的療效。據統計，自體脂肪組織移植到缺損部位后，通常其中40％～60％會被吸收。通過患者自身的脂肪組織內的干細胞，來構建具有完整生物學結構和功能工程脂肪組織無疑將是解決這一難題的最佳方案。如何實現從干細胞到脂肪細胞的分化，是構建工程北京麗都脂肪組織不可回避的問題。早在2001年，Zuk等人發現脂肪干細胞以來，就已經證明脂肪干細胞具有向脂肪、軟骨、成骨、成肌等多向分化潛能。傳統的成脂誘導分化采用的方法多為混合誘導劑法。成脂誘導劑的不足是帶有毒性，對人體有較大危害。

除了以上通過誘導劑進行體外誘導分化外，用成熟體細胞與干細胞共培養同樣可以使干細胞定性誘導分化。2000年，Maurin等采用間接共培養的方式，研究脂肪細胞對成骨細胞擴增和活性的影響，并證明成熟脂肪細胞對人的成骨細胞的擴增有抑制作用；但對成骨基質細胞的擴增及活性，無顯著影響。2003年Shigehisa等采用三維膠原凝膠中共培養脂肪細胞和內皮細胞的方式研究二者間的相互作用，得出結論：內皮細胞參與到脂肪組織形成和擴增的過程當中。2007年，Wang等通過實驗證明，鼠來源脂肪干細胞在膠原凝膠三維體系中，與OECs(Olfactory ensheathing cells-嗅鞘細胞)共培養過程中，能夠分化成為OECs-like(嗅鞘樣細胞)。

人脂肪干細胞在現有技術中有多種培養方式。比如：CN 102732477 B公開了一種人脂肪干細胞無血清基礎培養基。本培養基使用血清替代劑，由高糖型DMEM基礎培養基、人血清白蛋白、轉鐵蛋白、牛磺酸、還原型谷胱甘肽、銅藍蛋白、L-抗壞血酸-2-硫酸酯、α-生育酚琥珀酸單酯、亞油酸、α-酮戊二酸和硒組成。無血清基礎培養基因能免除常規含血清培養基中動物血清給人體健康帶來的潛在威脅，其培養的脂肪干細胞更適于臨床應用。

CN 104877962 A提供一種無血清的脂肪干細胞培養基，屬于干細胞技術領域，包括IMDM基礎培養基，還包括如下組分：重組人胰島素、重組轉鐵蛋白、維生素C、人血清白蛋白、成纖維細胞生長因子、血小板衍生生長因子、表皮生長因子、胰島素樣生長因子、轉化生長因子、纖維連接蛋白、胎球蛋白、茶多酚和干細胞生長因子。

CN 102757936 B公開了一種人脂肪干細胞增殖促進劑及其應用方法。所述的人脂肪干細胞增殖促進劑由胰島素、氫化可的松、甲狀旁腺激素、雌二醇、睪酮、血小板衍生生長因子-AB、表皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、L-谷氨酰胺、2-巰基乙醇、白血病抑制因子、L-抗壞血酸、生物素、地塞米松、IGF-I和SCF組成。

申請人發現以上的細胞培養基不僅成分復雜，有些組分成本高昂，而且細胞的培養一致性上還有改進的空間。

發明內容

本發明的目的是提供一種人脂肪干細胞特異性培養基，克服現有技術的培養基的缺點和風險。