[發明專利]超聲波輔助法提取大孔樹脂分離黃酮類化合物的方法

在審

• 申請號: 201711035045.2
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107693556A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 劉紅
• 申請（專利權）人: 海南師范大學
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P3/10;A61K127/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙)11491
• 代理人: 趙紅霞

技術領域

本發明屬于降糖藥物技術領域，尤其涉及一種超聲波輔助法提取大孔樹脂分離黃酮類化合物的方法。

背景技術

目前，中國糖尿病患者數量已超過一億，已成為僅次于印度位居世界第二的糖尿病國家。其中Ⅱ型糖尿病病發率非常嚴峻，對于糖尿病患者病發率急劇上升的趨勢，研究具有降血糖功效的特效藥物已迫在眉睫。神秘果含有奇特的神秘果素，是一種變味糖蛋白，能改變人的味覺，使原本酸度強烈的食物變成瓊漿玉露般的甘甜，因而又被稱為奇跡果、夢幻果。神秘果(Synsepalum dulcificum)系山欖科神秘果屬，中國云南、海南、廣東和福建等地區種植。神秘果葉含有較高的多糖、蛋白質、纖維和礦物質元素等成。其有降低糖尿病和高血壓等作用，還可以使胃口變好、降低胃酸、促進消化等功效。其性寒、味苦可入藥，有清熱燥濕的作用，而且還可以止瀉，對手機輻射也有一定的預防作用。神秘果葉可用于治療糖尿病、高血壓、尿酸和動脈硬化的天然藥物，并且能夠提高免疫力，增強肝膽功能。神秘果莖的功能成分具有抑制黑色素瘤和降低蘑菇絡氨酸酶的功效。神秘果除了具有改變味覺功能外，還具有改善胰島素抵抗及抗氧化能力。神秘果種子可以降低糖尿病小鼠空腹血糖值，促進胰島素的正常分泌。神秘果含有奇特的神秘果素，是一種變味糖蛋白，能改變人的味覺，使原本酸度強烈的食物變成瓊漿玉露般的甘甜，因而又被稱為奇跡果、夢幻果。神秘果(Synsepalum dulcificum)系山欖科神秘果屬，中國云南、海南、廣東和福建等地區種植。植物多酚是一類具有獨特生理功能和藥物活性的植物次生代謝產物，大量研究表明，植物多酚在抗氧化、抗誘變，抗腫瘤、抗輻射、抗衰老、抗病毒和預防中風等諸多方面具有顯著功效，因而在醫藥、生化、食品及日用化工等領域具有廣闊的開發前景。中國目前糖尿病患者數量已超過四千萬，已成為僅次于印度位居世界第二的糖尿病國家。其中Ⅱ型糖尿病病發率非常嚴峻，對于糖尿病患者病發率急劇上升的趨勢，研究具有降血糖功效的特效藥物已迫在眉睫。

綜上所述，現有技術存在的問題是：糖尿病患者病發率逐漸增多，急需更多的降血糖藥物，而神秘果不僅營養豐富，且葉子具有很高的藥用價值，但目前并沒有較為深入的黃酮成分研究報道。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種超聲波輔助法提取大孔樹脂分離黃酮類化合物的方法。

本發明是這樣實現的，一種超聲波輔助法提取大孔樹脂分離黃酮類化合物的方法，所述超聲波輔助法提取神秘果葉黃酮類化合物方法包括：通過采集新鮮神秘果葉，晾干，粉碎過篩60目抽濾，離心分離，減壓濃縮得到濃縮物；取一定濃度的神秘果葉黃酮類化合物的溶液，調節pH＝6.0，用恒流泵以40rpm恒流上樣放入預處理好的HPD500型大孔樹脂中；以水、10-20％乙醇溶液、50-60％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、無水乙醇進行梯度動態洗脫，每次洗脫直至流出液變為無色為止。

進一步，所述方法同時利用高效液相色譜分析各洗脫部位的主要化學成分為：水洗脫液的主要成分：表兒茶素衍生物和黃酮衍生物；50-60％乙醇洗脫液主要成分：表兒茶素、表兒茶素衍生物、對羥基肉桂酸、蘆丁衍生物和黃酮衍生物；70-80％乙醇洗脫液主要成分：對羥基肉桂酸、蘆丁衍生物和黃酮衍生物。

進一步，所述方法包括以下步驟：

步驟一，神秘果采集，晾干，粉碎過篩60目備用；

步驟二，利用超聲波輔助法提取神秘果葉黃酮類化合物，抽濾，離心分離，減壓濃縮，備用。

步驟三，將預處理好的HPD500型大孔樹脂，濕法裝入層析柱中。取200mL2.0mg/mL的神秘果葉黃酮類化合物的溶液(50-60％乙醇溶劑溶解)，調節pH＝6.0，用恒流泵以40rpm恒流上樣，動態吸附后測定流出液的體積及濃度(即吸光度值)。再分別以水、10-20％乙醇溶液、50-60％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、無水乙醇進行梯度動態洗脫，每次洗脫直至流出液變為無色為止。分別收集洗脫液，減壓濃縮，備用。

步驟四，利用高效液相色譜分析各洗脫部位的主要化學成分。

色譜條件：色譜柱：C18；柱溫：30℃，流動相：水:甲醇2:8，進樣量：50uL；流速：1mL/min；檢測波長：208nm、254nm。

標準品的制備：精密稱取5mg熊果酸、表兒茶素、蘆丁、沒食子酸、柚皮素、槲皮素、綠原酸、齊墩果酸、對羥基肉桂酸、兒茶素等標準樣品及混合標樣，水、60％、80％洗脫部位，用5mL無水甲醇(分析純)完全溶解，進行成分分析。