[發明專利]一種用于比率熒光檢測的固定化酶反應器及其制備方法

有效

• 申請號: 201711033936.4
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107828772B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 黨福全;王科;李南;楊蘭芳;劉俊霞;石海蘭
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12Q1/60;C12Q1/26;G01N21/64
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種用于比率熒光檢測的固定化酶反應器，其特征在于：在表面胺基化的介孔二氧化硅納米顆粒孔道內裝載熒光素后，在其表面修飾量子點，其中熒光素和量子點在同一激發波長下必須同時出現兩個發射峰；然后包覆一層ZIF-8，形成核殼結構的復合納米粒子，最后以該核殼結構復合納米粒子為載體固定化酶，從而得到用于比率熒光檢測的固定化酶反應器；

上述量子點為CdTe量子點，其粒徑為3～10 nm；

上述的熒光素為5-氨基熒光素；

上述的酶為膽固醇氧化酶；

上述表面胺基化的介孔二氧化硅納米顆粒的粒徑為50～100 nm，其孔道直徑小于3nm。

2.一種權利要求1所述的固定化酶反應器的制備方法，其特征在于它由下述步驟組成：

（1）將表面胺基化的介孔二氧化硅納米顆粒分散于 PBS緩沖液中，并加入熒光素，常溫超聲分散均勻后攪拌24小時，離心分離，得到裝載熒光素的介孔二氧化硅納米顆粒；

（2）將量子點和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽分散于PBS緩沖液中，常溫攪拌20～30分鐘，然后加入裝載熒光素的介孔二氧化硅納米顆粒，常溫孵化3～4小時，用PBS緩沖液離心洗滌，得到雙熒光的介孔二氧化硅納米顆粒；

（3）將步驟（2）得到的雙熒光的介孔二氧化硅納米顆粒分散于去離子水中，并加入十六烷基三甲基溴化銨，常溫攪拌20～30分鐘，用甲醇離心洗滌，所得沉淀超聲分散于甲醇中，并加入Zn(NO₃)₂?6H₂O和二甲基咪唑，50 ℃下靜置2～3小時，用甲醇離心洗滌，得到雙熒光的核殼結構介孔二氧化硅@ZIF-8復合納米粒子；

（4）將雙熒光的核殼結構介孔二氧化硅@ZIF-8復合納米粒子分散于PBS緩沖液中，然后加入酶，在3～5℃下孵育12～16小時，用PBS緩沖液離心洗滌，得到固載酶的核殼結構復合納米粒子，即用于比率熒光檢測的固定化酶反應器。

3.根據權利要求2所述的固定化酶反應器的制備方法，其特征在于：在步驟（3）中，所述Zn(NO₃)₂?6H₂O和二甲基咪唑摩爾比為1:1。

4.根據權利要求2所述的固定化酶反應器的制備方法，其特征在于：所述PBS緩沖液的pH=7.4。